EBV与细胞永生化【PPT】.pptVIP

20.1 概述 20.2 EBV基本结构及其表达产物 20.2.1 基本结构 20.2.2 表达产物 20.3 EBV感染和复制 20.3.1 感染 20.3.2 EBV转化外周血B细胞 20.4 EBV对B细胞的生长转化作用 20.4.1 对B细胞的激活和转化作用 20.4.2 与转化功能有关的病毒基因 20.4.3 LCLs与细胞永生化机制研究 20.4.3.1 LCLs与 p53及细胞周期调控相关基因 20.4.3.2 LCLs与端粒酶活性 20.4.3.3 LCLs与异常核型 20.5 EB病毒和人类肿瘤 20.6 展望 20.2 基本结构及其表达产物 (1)形态结构和理化特性 成熟的EB病毒颗粒为直径180nm的球形?其基本结构可分为核样物?核衣壳和包膜三部分? 20.2.2 表达产物 EBV基因结构中有84个开放读码结构(ORF),包括100多个基因,但只有9个基因能在体外感染转化的B细胞中表达蛋白质?这9个基因能编码6个EBV核抗原(EBNArb)和3个潜在膜蛋白(LMP1~3),其在细胞增生转化过程中作用不相同,以EBNA1?EBNA2?EBNA-LP和LMP1作用更加重要? ? 20.2.2.1 潜伏期的基因表达 1)核抗原家族(EBNA) 是一组核蛋白,目前共检出6种?他们都有共同的转录启动子和5’端,然而它们的主要编码区则由于不同的转录剪切而完全不同,由此而产生完全不同的核抗原?核抗原往往携带不同数量的重复片断,因而其Mr可以有较大的差异? EBNA1:EBNA1是一种序列特异性 DNA结合磷蛋白, 由BKPF1编码?可分为四部分:由89个氨基酸组成的N端,富有碱性残基;由多个”甘氨酸和丙氨酸”所组成的重复序列,长度约250个氨基酸；主要由碱性残基组成的短区域;一较长的主要由酸性或碱性氨基酸组成的C端?EBNA1在所有 EBV感染的细胞中唯一始终表达的蛋白质?它对于具有回文结构的同源序列 (TAGGATAGCATATGCTACCCAGATCCAG)具有很强的亲和性,与同源序列结合后可以诱导病毒基因组游离体的复制?启动多个潜伏感染期病毒基因的转录,并能调节宿主细胞基因的转录?有研究证实 EBNA1缺失的重组病毒会丧失使 B细胞永生化的能力?EBNA1的核心部分的 Gly-Ala重复序列,是主要组织相容性复合体 I型限制性递呈的顺式抑制因子,它能阻抑蛋白酶体对蛋白质的加工过程,影响抗原多肽的产生,从而防止EBV感染的细胞被细胞毒性 T细胞杀伤? EBNA3A,EBNA3B(EBNA-4), EBNA 3C(EBNA-6): EBNA3A,EBNA3B和EBNA3C是由有着共同起源的三个基因在 Cp或Wp启动子的作用下转录并翻译出来的三种亲水性核蛋白?EBNA3家族的成员都是转录调节因子,能抑制或者激活转录;它们可以通过抑制 RBP-Jκ蛋白与 DNA的结合间接性的抑制 EBNA2介导的TP1和 LMP1启动子的激活过程?对 EBV重组体的研究表明,EBNA3 A和 EBNA3 C对于 B细胞的体外转化是必需的,其中 EBNA3 C能够使细胞基因 (CD2 1 )和病毒基因 (LMP1 )的表达上调?抑制启动子 Cp?与视网膜母细胞瘤蛋白 (p Rb)相互作用而促进转化?EBNA3 B虽然不是转化所必需的,但它能诱导波形蛋白和 CD40的表达? 20.2.2.2即刻早期基因的表达 这是一组在病毒基因组从潜伏状态被活化后最早表达的一组蛋白,其产生不依赖于其他病毒蛋白的新合成?目前所知的:主要有BZIF1和BRLFl两种蛋白? 20.3 感染和复制 20.3.1感染 (1)B细胞 EB病毒在体外唯一能感染的细胞是人类和部分灵长类的成熟B细胞?一般认为这是因为EB病毒的受体限于在该细胞上表达?EB病毒受体是称为CR2或CD21的糖蛋白,Mr为14X104?这个由细胞编码的蛋白同时亦是补体成分C3d的受体?EB病毒通过膜糖蛋白gp320/220和CR2相附着?上皮细胞表面也找到了EB病毒受体,其序列和B细胞的EB病毒受体相差无几?然而上皮细胞在体外却对EB病毒不易感,可能EB病毒进入细胞还需要另外的B细胞特有的因子参与?在体内,EB病毒的主要靶细胞,是成熟的B细胞,尤其是处于静止状态的成熟B细胞,因为在这些细胞的表面,病毒受体分布最为致密? (3)病毒周期 EB病毒进入B细胞后,通常很快进入潜伏期?病毒基因组持续存在于细胞内?仅有很少量的病毒蛋白得以表达,无病毒DNA的增殖期复制;但病毒在受染细胞群中的少数细胞可