内关、公孙协同作用神经解剖学研究.docVIP

内关、公孙协同作用神经解剖学研究 　　(上海医科大学华山医院中西医结合研究所,上海200040;1辽宁中医学院针灸系) 　　摘 要 运用CB?HRP神经示踪法对内关、公孙配伍机理从神经解剖学角度进行探讨。结果:内关、公孙配伍运用,其针刺信息可在脊髓内经中间内、外侧核的神经元纤维感传至相应脊髓节段,再分别通过与交感神经、副交感神经形成突触联系,形成在脊髓层次的协同增效关系;同时通过两穴在脊髓内相应神经元向孤束核的投射纤维产生突触联系,实现对胃等内脏传入信息在脊髓和孤束核水平的调节整合作用。 　　主题词 穴,内关/解剖组织学 穴,公孙/解剖组织学 神经解剖学 内关为手厥阴心包经穴,公孙为足太阴脾经穴,此上下两肢、经脉不同、距离很远的两穴,在针灸临床上却常一起配伍运用,自古以来作为八脉交会穴的用穴之一,其机理何在?中医认为此两穴是通过心包经、脾经、阴维脉及冲脉交汇于胃、心、胸部位,来实现其治疗作用上的协同增效关系。历来对于内关、公孙的研究,多为中医传统理论探讨、临床应用观察及单穴实验研究,而对于两穴配伍相关性的研究,一直缺乏实验佐证。除了其它假说,目前大多认为经络腧穴实质与神经体液关系较大。所以,设想内关、公孙配伍能有效地治疗胃等内脏疾病,是否与两穴的神经纤维投射在中枢神经内的延伸与联系有关?两穴区的神经节段支配关系可能在中枢神经系统中有着一定的联系。本文应用霍乱毒素B亚单位(choleratoxinsubunitB)耦联辣根过氧化物酶(CB?HRP)法对大鼠内关、公孙单穴及两穴配伍后,在相应运动神经元的分布和树突构筑进行研究,以期对配穴的理论与临床实践提供一些神经解剖学基础。1 材料和方法本实验用中国协和医科大学合成的霍乱毒素B亚单位耦联辣根过氧化物酶(CB?HRP)作为神经解剖学探针;实验动物由中国医学科学院基础研究所动物繁育场提供的Wistar成年雌性健康大鼠,体重在200～250g之间,每组8只,并根据比较解剖学方法,选取大鼠内关、公孙穴位。 　　1.1 实验分组第1组:内关穴区注射CB?HRP;第2组:内关穴区注射CB?HRP后电针同侧公孙;第3组:公孙穴区注射CB?HRP;第4组:公孙穴区注射CB?HRP后电针同侧内关;第5组:胃壁注射CB?HRP;第6组:胃壁注射CB?HRP后电针右侧内关、公孙。 　　1.2 实验方法(1)第1组与第2组:先将0.3%CB?HRP5μl用微量注射器注射至右侧内关穴区(注射CB?HRP前先将动物麻醉),第2组待动物清醒后配伍电针右侧公孙穴,使用ZYZ?1型多功能针灸仪,频率为2～100c/s,疏密波,强度调在低档2～4之间,以动物能耐受为限,每次电针20min,每日1次,存活72h后灌注固定,取同侧脊髓C3～S2节段。第3组与第4组:将0.3%CB?HRP5μl用微量注射器注射至右侧公孙穴区,第4组待动物清醒后配伍电针右侧内关穴20min,每日1次,存活84h后灌注固定,取同侧脊髓C3～S3节段。第5组与第6组:将0.3%CB?HRP10μl用微玻管套接微量注射器多点注射于胃的前壁、后壁、幽门和贲门的浆膜下与肌层之间,第6组待动物清醒后再行电针右侧内关、公孙穴20min,每日1次,存活48h后灌注固定,取延髓、腹腔神经节和C4～L3节段背根神经节。(2)固定、取材及CB?HRP酶组化过程[1]:①固定标本:麻醉动物(戊巴比妥钠30mg/kg腹腔注射)后,将灌注针经由左心室插入至主动脉并固定,剪开右心耳。按顺序灌注下列液体(须将气泡排尽):a.21℃生理盐水150ml速灌,灌注压为100cmH2O。b.4℃的固定液500ml,先快速灌注1/3后,再慢速灌注,总灌注时间为60min。②取材及切片:小心剥离需要的神经组织(延髓、脊髓、背根神经节、腹腔神经节),投入30%的蔗糖PB缓冲液过夜。以冠状或水平切面冰冻切片,片厚40μm,接片于0.1MPB缓冲液中。③CB?HRP酶组化过程:将切片以双蒸水洗6遍后,以四甲基联苯胺(TMB)法[2]显色,光学显微镜明、暗视野观察,观察后在暗视野下照相。 　　2 实验结果第1组:脊髓前角中CB?HRP标记细胞的节段性分布,在C6～8节段Rexed分层属于第Ⅸ层中发现阳性标记运动神经元和神经终末纤维。每张切片可见1～5个阳性标记细胞,其树突野可达第Ⅶ层。 　　第2组:脊髓背角中CB?HRP标记细胞的节段性分布及其特点,a.经配伍电针同侧公孙穴后,内关穴区阳性标记运动神经元分布节段扩大,可在C4～8节段的第Ⅸ层中出现;其树突野扩大,向第Ⅶ、Ⅵ、Ⅴ层延伸,其中C8节段树突达第Ⅶ层,并向其中间内侧核、中间外侧核特异性延伸。b.在纵切面切片中见到其树突野向纵向、横向延伸和联系明显加强,并可在阳性标记运动神经元周围见到大量神经终末标记(见图1,图2)。