局灶性脑缺血微管相关蛋白-2表达及依达拉奉保护作用研究.docVIP

局灶性脑缺血微管相关蛋白-2表达及依达拉奉保护作用研究 　　缺血性脑损伤机制及其治疗一直是研究重点，其中对脑梗死神经细胞的再生、结构重建及可塑性机制等方面近几年已引起高度重视。MAP-2（微管相关蛋白-2）在神经发育、轴突再生、突触生长、结构重建等起着重要作用，是神经可塑性的重要物质基础。目前选择有效方法（康复、药物等）促进中枢神经可塑性与脑功能恢复是亟待解决的重点问题之一。? 　　本研究采用MCAO局灶性脑缺血模型，观察大鼠不同时间可塑性物质基础MAP-2表达动态变化及自由基清除剂依达拉奉对其表达和神经功能的影响，进一步从神经可塑性角度探讨局灶性脑缺血MAP-2的表达规律及依达拉奉的保护作用机制，为依达拉奉治疗缺血性脑血管病提供更深层次的理论依据。? 　　1 资料与方法? 　　1．1 实验动物和分组 健康雄性Wistar大鼠（吉林大学实验动物中心提供）54只，体质量（200±50）g，鼠龄3~4个月。随机分为3组，假手术对照组，盐水-缺血组，依达拉奉缺血组。缺血组缺血时间分别为1、3、7、14 d。? 　　1．2 给予途径、剂量 依达拉奉（由昆明积大制药有限公司提供），按3 mg/（kg#8226;d），腹腔注射，生理盐水（由长春豪邦制药公司生产），按与药物相同体积注射。? 　　1．3 动物模型制备 采用局灶性脑缺血模型，结扎颈内动脉，制备左侧大脑中动脉供血区永久性局灶性缺血模型。? 　　1．4 切片标本制备 用于普通病理及免疫组化的切片常规石蜡染色。? 　　1．5 免疫组化 染色采用SP法，MAP-2试剂盒为福州迈新生物技术开发公司产品。用PBS代替一抗做阴性对照，用已证实MAP-2阳性片做阳性对照。MAP-2以胞浆和树突棕黄色为阳性。? 　　1．6 图像分析 应用彩色病理图像分析系统对切片进行图像分析。免疫组化切片选取观察部位，每个区域选取3个200×镜下视野，测定MAP-2阳性细胞数。? 　　1．7 统计学方法 结果以（x±s）表示，均数显著性采用t检验，统计学处理应用SPSS12．0统计软件。? 　　2 结果? 　　2．1 病例形态学变化及依达拉奉对其的影响 假手术组：神经元分布正常。盐水-缺血组：缺血1 d：中心区组织明显稀疏，神经元大部分脱失，残存神经元变形、??染，细胞周围空泡变，周围区神经元可见明显缺血改变，散在嗜伊红细胞出现，梗死交接清楚，并可见胶质细胞浸润。缺血3 d，中心区淡染，脑组织稀疏明显重于1 d，神经元脱失更加，细胞周围大空泡变，神经元变形，核固缩、碎裂、溶解，失去完整结构，有大量细胞残骸，周边区范围缩小。缺血7 d、14 d：梗死灶边缘境界清楚，交界区神经元变形明显，形成三角形或不规则形，部分神经元失去正常的完整结构，顶树突延长，可见神经元脱失及明显胶质细胞增生、浸润。依达拉奉缺血组：梗死周边区缺血范围及脑水肿程度均较盐水-缺血组减轻，正常神经元数增多。? 　　2．2 MAP-2表达变化及依达拉奉对其的影响，见表1。? 　　 　　3 讨论? 　　近年研究表明，MAP-2 在神经元发育、分化、可塑性方面起主导作用，MAP-2主要存在于树突和胞体，是细胞骨架结构蛋白，对脑缺血非常敏感，常作为缺血诱导脑缺血损伤的标记物，也有实验观察到MAP-2可调节突触可塑性。研究显示中枢神经系统具有高度的可塑性，主要为神经元结构和功能的适应性变化，并已证实可塑性存在于神经元发育早期和成年后突触构成时期，与树突及突触的形态学变化有关，并受MAP-2磷酸化状态的调节，提示细胞骨架蛋白在神经可塑性过程中有重要作用[1]。? 　　研究表明，脑缺血后梗死中心区受损神经元MAP-2表达丧失，而相当完整的神经元和缺血周边区MAP-2表达选择性升高，此种改变与缺血后的神经元恢复相对应[2]；MAP-2减少或丧失可以严重或致命损伤神经元，脑缺血数分钟就会引起细胞支架的紊乱，导致蛋白成分不可逆变性，沙鼠颈总动脉闭塞3 min，同侧海马CA1区MAP-2明显减少，随缺血时间延长，MAP-2丢失，而且波及整个海马及其他部位[3]，Kudo等发现脑血流减少25%持续6周，在脑不同部位MAP-2选择性减少；研究显示尽管梗死中心区MAP-2免疫反应明显增加[4]。脑缺血损伤涉及细胞骨架蛋白的降解，MAP-2的改变可能在这一过程中起着重要作用，MAP-2对兴奋性氨基酸、生长因子等反应敏感，是细胞内信号传递的重要环节，参与神经元的生长和损伤后修复过程。? 　　本实验免疫组化结果显示，缺血1~14 d可见明显缺陷中心区表达淡染，而周边区表达明显增强，进一步说明MAP-2对不同缺血程度的敏感性不同。在缺血1、3 d，周边区表达增强明显，7、14 d表达增强并趋于稳定，相比无明显差异，提示MAP-2仍为早期缺血改变