振动模式扫描极化力显微镜及其在生物大分子丈量上的应用.pdfVIP

摘要 摘要 mode scanning 本论文阐述了振动模式扫描极化力显微镜(vibrating force polarization 和抗体分子)测量上的应用。 force VSPFM中是在导电的原子力显微镜(atomic 尖上加一偏压，由于样品表面的极化，在针尖和样品之间诱导形成电场，这个 电场力又称为极化力。与范德华力相比，极化力更强，其作用距离也更远，它 叠加在范德华力上，扩大了针尖与样品的距离。与以往的扫描极化力显微镜 SPFM的不同之处在于，VSPFM的针尖是在一驱动频率下振动。 本实验通过调节相关参数，如偏压、amplitudesetpoint(4。)的大小，实现 了针尖高度在极化力介导下的非接触方式和轻敲方式之间的自由切换。在 VSPFM的非接触方式中，长程的极化力叠加在范德华力上。这就克服了AFM 非接触方式中范德华力力程太短而成像不稳定的缺点；在极化力介导的轻敲方 式中，可以用比AFM轻敲模式中最小稳定成像力更小的力进行成像。 VSPFM中，针尖与样品的间距一般在几纳米范围内，范德华力在成像的力 中仍占相当一部分：特别是在极化力介导的非接触方式和轻敲方式的转折点处， 范德华力还是主要成像力，而极化力起稳定作用。这是与一般的静电力显微镜 不同的。 在生物分子的AFM成像上，虽然轻敲模式比接触模式横向剪切力更小， 对样品的移动和破坏也更小，但针尖压力仍然存在，使柔软的生物分子发生了 很大的变形，成像高度通常小于它们的直径。这种压力实际上是样品原子和针 尖原子间的排斥力，所以在AFM轻敲模式中测量柔软样品的高度存在一定问 摭嬖 题。本文提供了一种新的基于VSPFM的测屋树底上柔软样鼹高度的方法，可 敬奁一定程度上消除针尖压力的影响，使测量更为精确。 本文工作采用了VSPFM测量生物分子高度的两种方法： 一楚在主扫描串通过改交A；。来改变针尖的高度。首先在空自区域定点扫描 图内得到A。的变化值与针尖在Z轴上位移的关系：然后在待测棒品表西烽_。 懿筐不瑟藏，l、，这拜手针尖就不断趋遥样晶：觚祥晶的上表面歼始到衬底表面结 柬，从A。的变化值能够计算出样品的高度。 二是逶避调节Lift模式下的扫搐高度参数来敬交针尖高度。在主扫描中维 持针尖在一个恒定的高度；而在插入扫描中，不断减小担描赢度参数：从样黯 豹上袭嚣汗始到聿孪底袭蟊结束，扫播离凄参数的差值就是祥品的裔度。 本文应用VSPFM测量生物分子的高度，具商以下优势：静电力的导入扩 大了钟尖与群磊的距离，僮舒尖在垂盛方商上的移动更容易控铺，可以在不同 的高度上稳定成像：因为原子间的排斥力只在几个A的距离内起作用，针尖的 捡舞使撵斥力逐逮减，l、，也就便梯品掰受到静压力减小，所戳发生的形交也随 之减小，测得的样品高度更接近真实饭。在本论文基础上发展出新的测量方法 秘溅塞装嚣与现有技术耱魄，装置结稳魄较筒擎，使瑙方谯。 本实验在胶体金颗粒的高度测量上，发现VSPFM的结果与AFM轻敲模式 褥裂的结果类织；嚣对于DNA分子秽抗体分子CAl25，在巅样的针尖、样品 和环境条件下，测量值比AFM轻敲模式所得到的结果要大得多。不间样品的 结累不露，原瓣在予黢体会颗粒较必坚硬，在AFM针尖静匿力下变形程度小， 而DNA分子和抗体分子比较柔软，在针尖压力下变形程度大。 在枣度测鼙的基戳上，VSPFM进一步发震了对生黪样熬静弹性研究。AFM n 摘要 对细胞、细胞器及生物分子的弹性研究已经成为一个热点．但在小分子测量上， 衬底的干扰不可忽略。VSPFM在测量小分子的弹性时，针尖对样品施加的力比 以往的力曲线测量法小得多；在最小力处，针尖压力近似为零。这使得对小分 子的测量更准确，因为此时可以避免衬底的影响。在DNA分子的弹性测量上