gacrp对高糖高脂喂养巴马猪血糖及胰岛素敏感性影响.docxVIP

主要缩略语英文索引缩略语DMIRTZDsCDHFSDOGTTAMPKPEPCKG-6-Pase英文名Diabetes mellitusInsulin resistanceThiazolidinedionesControl dietHigh-fat/high-sucrose dietOral glucose tolerance test5’-AMP-activated protein kinasePhosphoenolpyruvate carboxykinaseGlucose-6-Phosphatedehydrogenase中文译名糖尿病胰岛素抵抗噻唑烷二酮正常饮食高脂/高糖饮食口服葡萄糖耐量实验腺苷酸活化蛋白激酶磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶葡萄糖-6-磷酸酶Acrp30Adipocyte complement-related protein of 30kD 脂联素gAcrp30cAcrp30PAI-1IPTGFFAASGlobular Acrp30 regionCollagen-like Acrp30/datasets/labcorp/html/chapter/mono/cf005500.htmPlasminogen/datasets/labcorp/html/chapter/mono/cf005500.htm Activator/datasets/labcorp/html/chapter/mono/cf005500.htm Inhibitor/datasets/labcorp/html/chapter/mono/cf005500.htm 1Isopropy-?-D-thiogalactosideFree fatty acidAtherosclerosis1脂联素球状区域脂联素胶原样区域纤溶酶原激活物抑制剂-1异丙基-β-D-硫代半乳糖苷游离脂肪酸动脉粥样硬化gAcrp30 对高糖高脂喂养的巴马猪血糖及胰岛素敏感性的影响摘要目的： 体外表达脂联素的球状区域（gAcrp30），研究重组 gAcrp30 对高糖高脂饮食喂养的巴马小型猪血糖及胰岛素敏感性的影响。方法： 转化已知质粒 pET32a-gAcrp30 至大肠杆菌 BL21(DE3) ，用 IPTG 诱导表达重组蛋白 gAcrp30。通过改变诱导剂 IPTG 浓度，改变诱导时间以及在不同的 OD600下诱导，检测对 gAcrp30 蛋白表达量的影响。BL21(DE3)-pET32a-gAcrp30在 IPTG 诱导后，重组蛋白 gAcrp30 主要以包涵体的形式存在,将该包涵体溶解、稀释复性后，用 Ni-NTA 亲和柱对其纯化。多次注射家兔重组蛋白，制备其抗体，Western-blot（免疫印迹法）检测抗体的效价。巴马小型猪喂养高糖高脂饲料 6个月，构建动物模型，腹腔注射 gAcrp30，用 Western blot 检测血浆中脂联素水平。观察给药后血浆葡萄糖水平及胰岛素敏感性变化，评估重组脂联素的药效性。结果： 当诱导剂 IPTG 浓度为 1mM 时，诱导时间为 3h，且细菌 OD600 值为 0.6时进行诱导，此时重组蛋白 gAcrp30 表达量最高。在大肠杆菌中表达 gAcrp30，Ni-NTA 亲和柱对菌体蛋白纯化，最终得到纯度达 95%的可溶蛋白。一次性注射gAcrp30 后，动物血液 gAcrp30 水平上升 20%~30%，血糖浓度显著降低（p0.05)。口服糖耐量（OGTT）实验表明脂联素改善了胰岛素敏感性。结论： gAcrp30 表达量的多少与诱导剂 IPTG 的浓度和 IPTG 的诱导时间以及何时诱导有关；重组 gAcrp30 具有生物学活性，且 gAcrp30 能降低高糖高脂饮食喂养的动物高血糖状况，改善其胰岛素敏感性，为人类糖尿病的治疗提供了一定的理论基础。关键词：gAcrp30；血糖；胰岛素敏感性；巴马小型猪2The Effects of gAcrp30 on Plasma Glucose and InsulinSensitivity in HFSD Bama-miniature SwinesABSTRACTAIM:To investigate the effects of recombinant human globular Acrp30 onmetabolization of diabetic swines induced by feeding a high-fat/high-sucrose diet(HFSD) .Methods: Plasmid PET32a-gAcrp30 was transferred to BL21(DE3) and recombinantprotein gAcrp30 was produced by IPTG introd