基因治疗的策略和方法.pptVIP

第二十三章 基因治疗 Chapter 23 Gene Therapy 基因治疗 gene therapy 第一节 基因治疗的策略和基本程序 Section 1 Strategy and Basic Procedure of Gene Therapy 第二节 基因治疗的临床应用现状 Section 2 Clinical Application of Gene Therapy * * 医学分子生物学 Medical Molecular Biology 医学分子生物学(第十二讲) 策略和基本程序 临床应用现状 第十二讲重点掌握内容 基因治疗的概念 基因治疗的基本方式 基因治疗的基本程序 基因治疗的靶细胞 常用基因转移的非生物学方法 常用基因治疗用载体 指改变以人遗传物质为基础的生物医学治疗，即通过一定的方式将人正常或野生型（wild type）基因或有治疗作用的DNA片段导入人体靶细胞以矫正或置换致病基因的治疗方法 腺苷脱氨酶ADA：首例，SCID，病毒载体，T淋巴细胞 适应症范围：单基因遗传病、恶性肿瘤、心脑血管疾病、神经系统疾病、代谢性疾病 一、修复错误基因/干预异常表达的基因 治疗方案： 主要包括将正常基因导入患者细胞内以弥补基因突变或缺失造成的功能缺陷，或抑制基因的表达等 基因治疗的基本方式： 基因置换 基因增补 基因抑制（抑制有害基因表达或过度表达的基因） 基因置换 用正常的基因，对基因组中的错误/突变基因在原位进行基因置换（gene replacement）或基因矫正（gene correction），是最理想的基因治疗策略 原理：基因定点同源重组技术 尚处于基础研究阶段，未能从理论和技术上得到突破 基因增补 不删除突变的致病基因，而在基因组的某一位点额外插入正常基因，体内表达出功能正常的蛋白质，达到治疗疾病的目的，是目前主要使用的基因治疗策略 可以用于替代突变基因，也可弥补原有基因表达不足 基因抑制（抑制有害基因表达或过度表达的基因） 向患者体内导入有抑制基因表达作用的核酸，如反义RNA、核酶、小干扰RNA、肽核酸等，通过这类核酸类药物抑制或降解相应的mRNA，以治疗疾病 二、基因治疗的基本程序 选择治疗基因 利用载体将治疗基因导入细胞/体内表达 选择基因治疗的靶细胞 治疗基因表达的检测 治疗基因的选择 细胞内的基因在理论上均可用于基因治疗 可有针对性的进行选择：生长因子、酶、受体… 引起突变的基因是什么？正常基因表达正常蛋白质 利用载体将治疗基因导入细胞或体内表达 基因转移系统： 非病毒法：物理方法、化学方法 病毒载体携带法 治疗基因导入病人体内的方式： 直接体内疗法（in vivo）：导入体内细胞/组织/器官表达 间接体内疗法（ex vivo）：靶细胞体外导入表达，回输体内 基因治疗的靶细胞 200多种体细胞，只有部分细胞能够体外培养 基因治疗的靶细胞：体细胞（病变组织细胞或正常的免疫功能细胞），不涉及生殖细胞 靶细胞： 造血干细胞：骨髓，脐带血，分化，基因组DNA稳定 皮肤成纤维细胞：易采集、培养、移植 肌细胞：T管系统，注射，DNA酶少，不整合，表达1年 三、非病毒载体和病毒载体 （一）基因转移的非生物学方法（非病毒载体法） 不使用病毒载体的导入方法 1. 物理方法 直接注射法、基因枪法、 电穿孔法 2. 化学方法 脂质体转染法、磷酸钙共沉淀、DEAE-葡聚糖法 3. 受体介导的基因转移 外源基因与配体偶联，细胞表面受体识别，靶向性 非生物学基因转移的比较 瞬时表达 表达水平低 不整合 大小无感染性 外源基因与配体偶联 靶向性识别细胞表面受体 受体介导法 效率低、时间短 易吞噬 无毒易操作无激活免疫 与DNA形成复合物 内吞作用进入细胞 脂质体法 表达时间短 效率高 高压脉冲电场使胞膜穿孔 DNA导入靶细胞 电穿孔法 内脏器官在体操作困难 简单高效 少量无痛 直径1μm金粉包裹DNA 高速轰击细胞染色体 基因枪法 肌组织 注射量 转化效率低 无毒易操作 表达时间长 裸DNA注射 质粒载体溶液注射肌组织 直接注射法 缺点 优点 定义 方法 （二）基因转移的生物学方法（病毒载体法） 病毒的特征 靶细胞定向感染性 宿主细胞寄生性 野生型病毒的改造原则 保留感染性 去除致病性 基因治疗用病毒载体 反转录病毒 retrovious 腺病毒 adenovirus 腺相关病毒 AAV 单纯疱疹病毒 HSV 埃巴二氏病毒 EB 痘苗病毒 Vaccinia virus 基因治疗用病毒载体基因组结构 反转录病毒载体 正链RNA病毒：5’-m7G5ppp5GM，3‘-polyA