干细胞以及胚胎干细胞.pptVIP

干细胞 组员 : 张薛杰 张康宁 张博华 赵鹏飞 2001年4月，美国科学家发现，从病人臀部和大腿处抽取的脂肪中，含有大量类似干细胞的细胞，这些细胞可以发育成健康的软骨和肌肉等。 2006年两项研究成果标志着干细胞技术正从一种概念，转变成能够看得见的事实： 美国科学家利用胚胎干细胞所衍生的运动神经元让瘫痪的老鼠恢复了行走能力； 英国科学家从胚胎干细胞中培育出来的精子，并使之与卵细胞结合，生育出幼鼠。 2010年1月韩国《朝鲜日报》报道，韩国建国大学兽医学院教授利用人类脐带血干细胞成功治愈了脊髓受伤导致两条后腿瘫痪的狗。 到底干细胞是什么东西，为何会受到如此的关注？干细胞是潜力无穷？还是被我们过度期待？ 15.1 干细胞的定义及分类 　干细胞（stem cell，SC）：是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。 自我更新是指干细胞具有分裂和自我复制的能力，子代维持干细胞的原始特征 分化潜能 是指干细胞分化成多种细胞类型功能细胞的能力 胚胎干细胞（ESC） 定义：是从着床前胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分化抑制培养分离的一种全能性细胞。 15.2.1 胚胎干细胞的分离 分离自胚胎内细胞团——主要途径 分离自原始生殖细胞（PGC） 分离自胚胎瘤细胞（EC） 15.2.2 胚胎干细胞的鉴定 1.碱性磷酸酶（AKP）活性 2.端粒酶活性 3.干细胞标记物 15.2.3 胚胎干细胞的体外培养 1.培养基与消化液 高糖和谷氨酰胺的DMEM培养基 2.饲养层细胞 功能： 提供物理支持 促进细胞增殖和抑制其分化 3.条件培养基与细胞因子 条件培养基：在基础培养基中按一定比例添加抑制因子、生长因子等成分配成的培养基 4.技术流程 内细胞团获得 获得动物胚胎 原代培养 将胚胎内细胞团分离以后接种在饲养层细胞上，细胞紧密，细胞界限不清晰，周围有时会有分化的扁平状上皮细胞 传代培养 胰蛋白酶消化→接种于新饲养层或条件培养基→抑制培养 干细胞的鉴定和分化程度评价 ?体外分化实验 ?体内分化实验 ?嵌合体形式 ?核移植 15.2.4 胚胎干细胞的体外诱导分化与筛选 §1细胞因子诱导法§2特殊性转录因子异位表达法§3选择性标记基因筛选目的细胞 15.2.5 胚胎干细胞研究存在的问题及发展前景 存在问题 来源限制 由于需要胚胎作为胚胎干细胞分离材料，人类ESC研究存在细胞来源限制问题 体外培养困难 ESC在体外培养会自发分化，而且机制还不清楚，控制胚胎干细胞分化的抑制技术有待完善 安全性 胚胎干细胞和多能成体干细胞的自发分化是多向的，干细胞移植后的成瘤性风险较大 伦理道德问题 支持者：ES细胞的研究有助于根治很多疑难杂症，是一种挽救生命的慈善行为，是科学进步的表现 反对者：进行胚胎干细胞研究就必须破坏胚胎，而胚胎是人尚未成形时在子宫的生命形式。 因此，如果支持进行胚胎干细胞研究就等于是怂恿他人“扼杀生命”，是不道德的，违反伦理的。 ESC的应用前景 生产克隆动物 生产转基因动物 用于器官组织移植 用于细胞治疗 * * * 对称分裂 不对称分裂 干细胞 两个干细胞 干细胞 祖细胞 单能干细胞：只能分化成单一类型的干细胞（表皮基质细胞） 多能干细胞：能够分化成两种或两种以上的干细胞（红细胞、巨噬细胞、淋巴细胞） 全能干细胞：具有无限分化潜能的干细胞（胚胎干细胞） 胚胎干细胞的分离 胚胎干细胞的鉴定 胚胎干细胞的体外培养 胚胎干细胞的体外诱导分化和筛选 满足ESC旺盛分裂 合成蛋白质与核酸 补充成分：15%胎牛血清和β-巯基乙醇等 消化液中的EDTA和胰蛋白酶比一般动物细胞高 饲养层细胞能合成和分泌成纤维细胞生长因子和抑制因子 细胞因子： ①白血病抑制因子（LIF） ②碱性成纤维生长因子（FGF） 内细胞团获得 原代培养 传代培养 干细胞的鉴定和分化程度评价 剥离胚胎获得内细胞团 消化 分散细胞团 胚胎干细胞一旦建立迅速增殖，一般约18~24h分裂一次，每2d需要更换一次培养液，每3~4d需要传代一次