菌种分离与检查 上传9.ppt

药品微生物限度检查——控制菌检查 菌种分离鉴定流程 增菌 分纯 初步鉴别试验 革兰染色 生化试验 酶类试验 抗生素敏感性试验（用于菌种鉴定） 全面鉴定 血清分型 毒素分析 基因分型 蛋白组分析 自动化仪器分析（生化，酶学，基因序列等） 2 供试品的制备 参看药典微生物限度检查法 有抑菌活性的检品应进行预处理 稀释法 离心沉淀集菌法 3000r/min离心30min，有不溶性沉渣先500r/min离心5min 薄膜过滤法 0.45um± 0.02 100ml 中和法 磺胺类100ml中1~5ml1%对氨基苯甲酸；砷汞，硫乙醇酸盐；洗必泰，聚山梨醇酯80 自然沉降法 难溶于水的抗菌制剂 同时做阳性和阴性对照 了解常用的培养方法和常用培养基上各控制菌菌落特征，知道如何进行菌种分纯，以便于进行下面的试验 3 革兰染色、镜检 3.1 操作步骤 3.1.1 制片-过火固定，避免水冲，破坏细胞结构使染料易透过 3.1.2 结晶紫染色-1分 3.1.3 碘液媒染-1分 3.1.4 乙醇脱色-30秒 3.1.5 沙黄复染-30秒 3.2 染色结果 革兰阳性菌呈蓝紫色；革兰阴性菌呈红色。可以分别用金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌作质控株 3.3 革兰染色注意事项 3.2.1 玻片必须洁净 3.2.2 涂片菌量宜少，菌不可浓 3.2.3 新鲜培养物 3.2.4 脱色是关键 3.3 革兰染色意义