食品卫生微生物学.ppt

金黄色葡萄球菌的检验 1.　样品处理：无菌取25g或25mL食品样品，放入225mL灭菌生理盐水中均质，制成10-1稀释液。 2. 增菌培养：将10-1稀释液接入7.5%NaCl肉汤或胰蛋白胨肉汤中，37°C培养24小时。 3. 分离培养：将上述稀释液或培养液分别划线血平板和Baird-Parker平板，置37°C培养24-48小时。金黄色葡萄球菌在血平板上呈金黄或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker平板上菌落为圆形，直径2-3mm，颜色灰或黑色，周围有一浑浊带。 4. 染色观察：挑取可疑性菌落进行革兰氏染色 5. 血浆凝固酶试验 金黄色葡萄球菌的单个菌落在Baird-Parker琼脂平板上呈圆形,表面光滑、凸起、湿 润,直径2～3mm。灰黑色至黑色,有光泽,常有浅色(非白色)的边缘,周围绕以不透明圈 (沉淀),其外常有一清晰带。 志贺氏菌属及检验 志贺氏菌属的细菌（通称痢疾杆菌），是细菌性痢疾的病原菌。临床上能引起痢疾症状的病原生物很多，有志贺氏菌、沙门氏菌、变形杆菌、大肠杆菌等，还有阿米巴原虫、鞭毛虫、以及病毒等均可引起人类痢疾，其中以志贺氏菌引起的细菌性痢疾最为常见。人类对痢疾杆菌有很高的易感性。 志贺氏菌病常为食物爆发型或经水传播。 　和志贺氏菌病相关的食品包括色拉（土豆、金枪鱼、虾、通心粉、鸡），生的蔬菜，奶和奶制品，禽，水果，面包制品，汉堡包，和有鳍鱼类。 　志贺氏菌在拥挤和不卫生条件下能迅速传播，经常发现于人员大量集中的地方如餐厅、食堂。 生物学性状 志贺氏菌属细菌的形态与一般肠道杆菌无明显区别，为革兰氏阴性杆菌，长约2-3μ m ,宽0.5-0.7μ m 。不形成芽胞，无荚膜，无鞭毛，有菌毛。 需氧或兼性厌氧。营养要求不高，能在普通培养基上生长，最适温度为37℃，最适pH为6.4-7.8。37℃培养18-24小时后菌落呈圆形、微凸、光滑湿润、无色、半透明、边缘整齐 本菌属都能分解葡萄糖，产酸不产气。 志贺氏菌的检验 1. 增菌 ：GN增菌液 6-8h 2. 分离和初步生化试验 ：HE琼脂平板和EMB平板 ，TSI 3. 血清学分型: 挑取三糖铁琼脂上的培养物，做玻片凝集试验。 4. 生化试验 :　葡萄糖铵,西蒙氏柠檬酸盐, 赖氨酸和鸟氨酸脱羧酶,pH7.2尿素,KCN生长水杨苷和七叶苷的分解 培养特征 1、多数为需氧或兼性厌氧，少数为微需氧或专性厌氧。 2、对营养要求高，普通培养基不能良好生长，（需加血清液，腹水等） 3、最适温度37℃，pH7.4-7.6 4、在液体培养基中，溶血菌株，呈絮状或颗粒状沉淀生长（上清下浊）；不溶血球菌，均匀浑浊生长，如粪链菌。 5、在血平板上，形成灰白色，半透明、表面光滑、有乳光圈形突起的细小菌落，直径0.5-0.75mm，针尖大小，菌落周围出现溶血环。 溶血性链球菌菌种形态特征与染色 链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6- 1.0μm，呈链状排列，长短不 一，从4-8个至20-30个菌细胞组成 不等， 该菌不形成芽胞，无鞭 毛，易被普通的碱性染料着色，革 兰氏阳性，老龄培养或被中性粒细 胞吞噬后，转为革兰氏阴性。 流行病学 溶血性链球菌在自然界中分布较广，存在于水、空气、尘埃、粪便及健康人和动物的口腔、鼻腔、咽喉中，可通过直接接触、空气飞沫传播或通过皮肤、粘膜伤口感染，被污染的食品如奶、肉、蛋及其制品也会对人类进行感染。上呼吸道感染患者、人畜化脓性感染部位常成为食品污染的污染源。 * * 二、检验样品的制备 （一）样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。 （二）检验冷冻样品前应先使其融化。可在0－4℃融化，时间不超过18小时，也可在温度不超过45℃的环境中融化，时间不超过15分钟。 （三）检验液体或半固体样品前应先将其充分摇匀。如容器已装满，可迅速翻转25次；如未装满，可于7s内以30cm的幅度摇动25次。从混样到检验间隔时间不应超过3min。 (四)开启样品包装前，先将表面擦干净，然后用75％乙醇消毒开启部位及其周围。 1．非粘性液体样品可用吸管吸取一定量，然后加入适量的稀释液或培养基内，吸管插入样品内的深度不应超过2.5cm,也不得将吸有样品的吸管浸入稀释液或培养基内。 2．粘性液体样品可用灭菌容器称取一定量，然后加入适量的稀释液或培养基。 3.固体或半固体样品可用灭菌的均质杯称取一定量，再加适量的稀释液或培养基进行均质，从样品的均质到稀释和接种，相隔时间不应超过15分钟。 三、检验 （一）实验室收到样品后，首先进行外观检验，及时按照国家标准检验方法进行检验，检验过程中要认真、负责，严格进行无菌操作，避免环境中微生物污染。 （二） 检验所使用的稀释液、试剂、培养基接触