金标法和ELISA法在无偿献血者中检测HBsAg比较.docVIP

金标法和ELISA法在无偿献血者中检测HBsAg比较 　　 【摘要】目的：为搜索出无偿献血者中HBsAg阳性样品。方法：使用胶体金免疫层析法与ELISA法对无偿献血者血标本进行筛查。结果：检测17 582份，金标法结果与ELISA法比较，本法的特异性为93%，敏感性为100%，总符合率为99.6%，整个过程时间仅需15-30分钟。结论：金标法其特异性和敏感性不亚于ELISA法，并且操作简单，不需要任何仪器和实验工具，完全可以有效用于无偿献血工作的现场筛选和临床急症手术前的检测。 　　【关键词】无偿献血者；乙型肝炎表面抗原；酶联免疫吸附试验；脱氧核糖核酸 　　文章编号：1009-5519（2007）10-1431-03 中图分类号：R446 文献标识码：A 　　乙型肝炎HBsAg是献血者健康检查重要项目之一，对于HBV传染的大多标志物都有相应的检测试剂盒供应，而作为初筛检测HBsAg的金标法和临床诊断常用的免疫学方法ELISA法（酶联免疫吸附试验）检测有何差异，现将结果报道如下。 　　 　　1 材料 　　 　　1.1 标本来源：金标法和ELISA法标本来源2001年8月18日-2004年4月1日江都市中心血库17 582例无偿献血者的全血及其无抗凝剂的血清标本。 　　1.2 试剂：金标试剂盒来源于艾康生物技术（杭州）有限公司（批号20030505；ELISA试剂盒来源上海科华公司（批号，洛阳华美公司（批号，厦门新创公司。 　　1.3 ELISA仪器：TECAN酶标仪（瑞士TECAN公司）；ROTINA平板离心肌；96孔圆底微板；瑞士Thermostar震荡器。 　　 　　2 方法 　　 　　2.1 金标法：用采血管吸取50 ?滋l左右的无空气全血垂直滴加于试剂条的加样处，血标本与预包被的乳胶颗粒结合的抗HBsAg单克隆抗体反应。然后，混合物随之在毛细效应下向上层析。如果是阳性，乳胶抗体结合物在层析过程中先与标本中的HBsAg结合，随后结合物会被固定在膜上的HBsAg抗体结合，在测试区会出现一条红色条带。这条带是HBsAg抗体-HBsAg-乳胶颗粒的复合物在膜上结合形成的。如是阴性，则测试区内将没有红色条带。无论HBsAg抗体是否存在于标本血样中，一条红色带都会出现在质控区内。质控区内所显示的红色条带是判断是否有足够标本，层析过程是否??常的标准，同时也作为试剂的内控标准。测量结果应在15分钟内读取，强阳性标本2分钟内可检出。 　　2.2 ELISA法：所有检测操作程序和结果判断均按试剂说明书严格执行，并在试剂有效期内使用。将乙肝表面抗体（通常是单克隆抗体）包被于微孔表面，待测血清加入微孔内并孵育，结束后洗去血清，并加入酶结合物，再次孵育。酶结合物是酶标记的特异性抗体（通常是单克隆抗体）。在孵育过程中，酶结合物与已经和固相上HBsAb结合的HBsAg结合，夹心的组成为抗体-抗原-抗体的双夹心结构。洗去多余的酶结合物，与抗球蛋白的试验同样方法加入显色剂。 　　2.3 结果判断标准：金标法：两条红色条带出现为阳性。ELISA法：每个标本的OD值/Cut-off比率1.0为阳性。 　　 　　3 结果 　　 　　3.1 金标法和ELISA法对HBsAg的检测结果比较见表1。其中金标法的HBsAg阳性率为5.3%。而ELISA法的HBsAg的阳性率为5.7%，漏检人数为70名，其中金标法检出的阳性人员ELISA法也都能检测出。经过配对统计，χ2=0.65,P0.05，金标法和ELISA法之间差异无显著性。 　　3.2 由表1的结果可得到金标法与ELISA法的结果阳性符合率为93%，阴性符合率为100%，漏检率为3.9%，假阴性率为7.0%，总符合率为99.6%。 　　 　　4 讨论 　　 　　金标试剂是一种定性筛选乙型肝炎HBsAg存在的试剂，但不能确定标本中病毒的含量，方法学上由于其操作简便，因此更适用于无偿献血的现场初筛和临床急症手术前的检测。ELISA法作为一种特异性高，能够灵敏并且定量地测定病毒数量，它与金标法差异无显著性，说明金标试剂完全可以有效地应用于无偿献血工作的筛选。无偿献血实施以来，献血人群模式和乙型肝炎检测方法的改变，综合表现为相对HBsAg报废率的增加。有文献表明，无偿献血者中输血感染性疾病阳性率明显低于职业卖血者。献血人群由原有偿献血者改变为城市公民为主的无偿献血，且多为初次献血，其中无偿献血者相对有偿献血者来说未经过多次重复体检，所以合格率低。但机关事业单位人员、武警战士、学生相对合格率较高。笔者认为，他们大多经过1年一次的体格检查，或入伍入学体检，在这过程中通过多