中药药效成分分析中的色谱新方法研讨.pdfVIP

摘 要 随着中药现代化进程的不断前进，中药药效的物质基础、药理学、药物代谢过程 及相关的生物学、药物的质量控制等等方面的研究越来越成为中药现代化的关键问 题。运用现代分析仪器，发展高效的分离分析手段和方法，为解决此类问题提供了一 个契机。色谱作为一种现代分离分析手段，在中药的开发和研究方面发挥了非常重要 的作用，尤其是在中药有效成分的定性定量分析及质量控制上。但是中药成分复杂， 结构多样性、含量差别等等干扰分析的因素诸多。单纯采用单一色谱系统，不能提供 中药全面的信息。利用多种色谱模式的串联，以及其与其他化学、生物技术的有效结 合，可以从不同角度探讨中药的化学组成，以及相关的药效关系，更好地解决中药复 杂体系的分离与分析，并为高通量筛选中药中有效组分提供物质依据。 本论文主要发展和研究了以色谱分离技术为基础的多种分离分析模式，包括建立 纳升液质联用系统用于中药中标准物质的质量分析；优化多维色谱系统用于中药分 离；以两维色谱为基础结合体外酶模型和细胞模型查找相关的有效成分；利用新型材 料固定靶酶，通过色谱／质谱等技术检测固定酶的活性并运用于相关抑制剂的筛选。具 体的研究工作和成果的摘要如下： 第一章作为前言简单回顾了中药现代化的发展，阐述了中药药效研究的基本思路 和策略；综述了中药研究中的各类化学分析方法；重点描述了色谱在中药研究中的重 要作用和近几年来的发展，以色谱分析前的预处理提取方法为始，举例说明了新型色 谱技术在中药定性定量剖析、复杂体系分离分析以及高通量药物筛选中的研究和应 用。同时也概述了其他新技术新方法与色谱分析技术结合在中药组分分析中的新进展 和应用。通过现状描述和前景评估，阐明了本课题选题和研究的学术背景和技术意义。 第二章主要研究和考察了色谱分析技术在中药质量控制中的应用，建立了纳升级 液相色谱质谱联用系统，利用色谱的高效分离能力和质谱的灵敏性，用于中药复杂体 系的定性定量分析。此前，关于液质联用系统用于中药有效成分定性定量分析的报道 较少，尤其是低浓度中药的痕量物质分析。以金银花为例，我们首次使用纳升色谱／ 质谱联用(mn0．LC／MS)鉴定和定量中药中的标准物质。比较色谱保留时间和质谱结 构解析的信息，快速专一地确认金银花中标准物质绿原酸的定性信息；通过对绿原酸 标准曲线的制作，建立绿原酸外标法的定量标准。作为分离前预处理方法的优化，考 察了不同提取方法，包括微波辅助萃取的新方法，常规提取方法，如回流萃取，超声 萃取等对金银花中绿原酸的萃取效率。比较显示微波辅助萃取能够在较短时间内，即 4分钟之内，提供较好的提取效率。同时，液质联用系统用于定性定量分析的有效性 和可靠性也经过考察方法的线性、检测限、准确性和回收率得到确认。结果显示方法 第l页 ng／mL，标准偏差2．54 的线性范围在0．8—20ng／mL，相关指数R2在0．991，检测限为O．5 少样品损耗、节约时间、降低试剂成本等优点，可用于中药标准物质的定量和定性评 估，尤其对于那些含量较少的痕量物质更能体现其优势。 第三章建立和优化了离线的两维色谱系统用于中药组分的分离，提高了色谱分离 的峰容量和分辨力，解决了两维间兼容性问题。首先将中药千层塔在第一维色谱进行 初步分离，这里选用分辨率相对较低的CN柱和甲醇／水流动相作为第一维。按照时间 搜集各组流分后，再将这些流分通过第二维色谱进行进一步的细分。第二维色谱采用 ODS和乙腈／水的反相色谱模式。为了考察这种色谱模式的有效性和兼容性，将不同 提取时间和不同产地的千层塔作为目标物进行分离。不同的谱图表现证实了这种离线 两维系统的高分辨能力。相对一维色谱，两维色谱系统能可靠地提供中药更多的信息， 为药物的鉴定和后期的药效药理研究提供必要的分离基础。 第四章重点开发了以酶为药物靶点的有效组分筛选系统，利用酶的特异性结合和 色谱、质谱的高效分离鉴定能力快速有效地确认中药组分中的有效成分，实现了有效 成分确定、分离的嫁接。将糖尿病治疗中的关键酶0【一葡萄糖苷酶，通过乙醛基团与 氨基基团的作用，借助戊二醛的螯合基团固定在氨基磁性纳米微球上。固定化的酶用 于底物的水解反应，通过高效液相色谱考察产物产量的变化评估酶的催化活性。与传 统的生物检测方法比较，这种预制备的固定化酶在活性的高低和系统稳定性上都有更 好的表现，并