仿细胞膜色谱牢固相的制备及其应用.pdfVIP

摘 要 生物色谱技术是对中药活性成分筛选，分离和结构鉴定同时进行的新技术。通过对已有生物 色谱模型优缺点的分析，本论文提出在固定相表面，构建～层类细胞膜结构以制得仿细胞膜色谱 固定相，建立一种快速高通量筛选药物新模型一仿细胞膜色谱法，以宁夏民族地道药材一苦豆子为 例，阐明仿细胞膜色谱法在中药活性成分筛选中的应用。主要研究工作如下： 1． 以三氯氧磷、氯化胆碱和甲基丙烯酸-2-羟乙酯(HEMA)为原料，合成了含磷酰胆碱基团的 2一甲基丙烯酰氧乙基磷酰胆碱(MPC)，再将MPC嫁接聚合到活化硅胶表面，制得磷酰胆碱 色谱同定相；将磷酰胆碱色谱柱作为两性离子交换色谱柱同时分离了2种酸性和2种碱性标 准蛋白；研究了四类不同结构药物在磷酰胆碱色谱柱上的保留特性(Igkpcc)，同时与磷脂膜 artificialmembrane 色谱(immobilized 较，结果表明，1出Kc与lg缸AM、lgDo／B．7．4分别具有明显的相关性，说明用磷酰胆碱层模拟 细胞膜磷脂层与药物的相互作用是合理的。 2．用柱层析法从大豆磷脂中纯化出脑磷脂，将脑磷脂嗣定于醛基改性后的硅胶上并自组装成双 层膜，得到脑磷脂双层膜色谱固定相，用于预测四类不同化学结构药物的膜渗透性。 3．用离心法得到支气管细胞膜，并将它吸附于酸活化后的硅胶表面，制得支气管细胞膜色谱同 定相。测定了已知受体药物在支气管细胞膜色谱柱上的保留特性，结果表明，已知受体药物 中，仍．肾上腺素受体激动剂与阻断剂有保留行为，但拖尾现象严重，无法用于苦豆子活性成 分的筛选。 4．用亲和层析法纯化得仍．肾上腺素受体，并将其同定于含环氧基团的磷酰H日．碱色谱州定相上， 制得仿细胞膜色谱fiIif定相。用前沿色谱法测定了硫酸沙丁胺醇、重酒／fi酸去甲肾上腺素和盐 酸·普蔡洛尔与伤-AR的结合常数。结果表明，仿细胞膜色谱l州定相上的仍．AR与约物的结合 常数顺序与文献报道一致，说明历．AR经过纯化，同定化，装梓等操作后，依然保持其原有 的活性。 5．将制各的仿细胞膜色谱固定相应_f}j于苦豆子活性成分的筛选。结果表明，仿细胞膜色谱柱筛 选出了苦豆子中与历．AR作刚的活性成分，说明该色谱法为中药有效成分的筛选提供了一种 新的技术与方法。 关键词：仿细胞膜色谱，药物筛选，磷酰胆碱，仍一肾上腺素受体，苦豆子 Abstract isthenew whichCallbeusedfor and Biochromatographytechnology screening，isolating the in s缸1lcn鹏ofactive traditionalChinesemedicineatthesametime．Based identifying components onthe cellmembrane reportedbiochromatography,WeWeparedimitating chromatographicstationary cellmembranetothe of phasesbyimmobilizingimitating layer surfaces stationary chromatographic tOconstituteanew cellmembrane phases high-throughputdrugscreeningmodle···-imitating chromatogr- medicinal which in xiafor -raphy．Takingplant-Soph