功能化硅壳纳米颗粒应用于质粒DNA分离纯化的研讨.pdfVIP

硕}学位论丈 摘 要 随着DNA测序、基因治疗、基因疫苗等领域的广泛发展，对拓展各种高效的质粒 DNA分离纯化方法提出了越来越迫切的需求。硅壳纳米颗粒作为一种新型功能性纳米 材料，由于其制备简便，具有良好的化学稳定性、较大的比表面积及较好的生物相容性 等特点，在生物分离领域表现出了广泛的应用前景。本论文利用氨基化硅壳纳米颗粒／ 氨基化硅壳磁性纳米颗粒与质粒DNA的静电吸附原理，建立了基于氨基化硅壳纳米颗 粒／氨基化硅壳磁性纳米颗粒的质粒DNA快速分离纯化方法。该方法免去了传统分离纯 化质粒DNA的酚／氯仿法的毒副作用和操作繁杂等缺点，为DNA的分离纯化提供了一 种新的手段和方法，同时也进一步拓展了功能化硅壳纳米颗粒在生物医学研究中的应 用。本论文还发展了一种基于硅壳荧光纳米颗粒的肿瘤检测新方法。 1、氨基化硅壳纳米颗粒分离纯化质粒DNA的研究 利用中性pH环境下带J下电的氨基化硅壳纳米颗粒与带负电的质粒DNA的静电相 互作用原理，发展了一种基于氨基化硅壳纳米颗粒的质粒DNA分离纯化方法。以 的吸附能力，以及吸附在氨基化硅壳纳米颗粒表面的质粒DNA解离情况，在此基础上， 进一步考察了采用氨基化硅壳纳米颗粒分离纯化获得的质粒DNA的生物活性。结果表 明质粒DNA可以很好的吸附在氨基化硅壳纳米颗粒上形成氨基化硅壳纳米颗粒一质粒 DNA复合物，同时成功实现了氨基化硅壳纳米颗粒一质粒DNA复合物中质粒DNA的 解离，而且通过该方法分离纯化的质粒DNA依然具有很好的生物活性。 2、氨基化硅壳磁性纳米颗粒分离纯化质粒DNA的研究 利用中性pH环境下带正电并在外磁场作用下具有超顺磁性的氨基化硅壳磁性纳米 颗粒与带负电的质粒DNA的静电相互作用原理，发展了一种基于氨基化硅壳磁性纳米 分别考察了氨基化硅壳磁性纳米颗粒对质粒DNA的吸附性能，以及影响吸附在氨基化 硅壳磁性纳米颗粒表面的质粒DNA解离效果的因素，同时将本法跟传统分离纯化质粒 DNA的方法进行了比较，在此基础上，进一步考察了采用氨基化硅壳磁性纳米颗粒分 离纯化获得的质粒DNA的生物活性。结果表明在外磁场作用下，可以实现氨基化硅壳 磁性纳米颗粒．质粒DNA复合物的快速分离，同时成功实现了氨基化硅壳磁性纳米颗粒 一质粒DNA复合物中质粒DNA的快速解离，并且最终解离效果对解离状态、解离温 度、解离时间和次数等依赖不明显。同时本方法比传统方法具有更好的分离纯化效率， 而且通过该方法分离纯化的质粒DNA依然具有很好的生物活性。 3、硅壳荧光纳米颗粒一氨基葡萄糖复合物(FSNPs．DG)与肿瘤细胞的作用研究 基于肿瘤细胞葡萄糖代谢旺盛的机理和本实验室发展成熟的硅壳荧光纳米颗粒标 Ⅱ 基于功能化硅壳纳米颗粒在质粒DNA分离纯化中的应用 记技术，发展了一种新型的肿瘤检测方法。通过物理吸附法制备了硅壳荧光纳米颗粒一 氨基葡萄糖复合物(FSNPs．DG)，并选择三株肿瘤细胞和一株正常细胞作为考察分析对 象，基于肿瘤细胞表面高表达对葡萄糖具有高亲和力的葡萄糖转运蛋白考察了 胞的作用研究，即肿瘤细胞对FSNPs．DG吞噬情况。结果显示利用物理吸附法制备出 高于正常细胞。 ● 关键词：氨基化硅壳纳米颗粒；氨基化硅壳磁性纳米颗粒：静电吸附；纯化；质粒DNA III 硕．【：学位论文 Abstract The demandforefficient methodsof DNA for production plasmidhasincreased vastly in andSOon．Asakindof widelyapplications vaccine：DNA