核酸适体分子识别和工具酶信号放大在生化剖析中的应用研究.pdfVIP

在生化分析中的应用研究 摘要 核酸适体作为一种新型的分子识别工具，与靶分子之间分子谚{别功能与抗体 极为相似．但适配体作用靶分子范围极广(包括毒素、 免疫原性弱及不具有免疫 原性的物质)，且具有核酸自身稳定性强、变性复性快速可逆、易功能化修饰与 标记及作为优良的纳米器件等诸多优点． 以核酸适体为识别分子的分析技术发 展迅速。 信号放大技术，尤其是利用工具酶结合其他分析检测技术的信号放大技术， 由于其方法简单，灵敏度和特异性高，反应时间相对较短，近年来在痕量物质分 析方面的得到了迅速发展。 本文以钾离子为研究模型，基于核酸适体和荧光探针技术，发展了两种检测 小分子和蛋白质检测的分析方法；并且利用工具酶信号放大技术，发展了检测单 碱基多态性的新方法。从该思路出发，本文开展了一下三方面的研究工作： 1、基于核酸适体识别和芘分子荧光探针检测钾离子的研究 本章基于核酸适体和芘分子基团，研究了一种在均相中检测钾离子的简单方 法。整个实验过程如下：以3’端修饰芘分子的核酸适体作为分子识别元件，而在 它的互补探针的5’端修饰芘分子，当它们杂交后，形成芘激基二聚体，而在存在 钾离子时，互补探针与核酸适体解链，同时伴随着485nm处的芘激基二聚体的 荧光峰降低。而在不存在钾离子时，485nm处的荧光峰不会发生变化。通过条 件优化，钟离子的检测的线性范围为8。0×10气1．0×lo．2M，检测限为6．0× 高特异性检测。 2、基于核酸适体和芘标记分子信标检测钾离子的研究 本章中我们研究了一种新颖、灵敏的基于核酸适体和芘标记的分子信标对钟 离子检测的方法。同样，核酸适体做为分子识别元件，而两端标记芘分子的分子 信标作为信号转换元件。在存在钾离子时，分子信标链与核酸适体解链，自身发 生杂交，两个芘分子相互靠近，形成芘激基二聚体，在485nm处产生荧光峰， 荧光峰的强度与加入钾离子的量有关。而不存在钾离子时，只在395am处有荧 光峰。在优化条件下，485nm荧光峰的强度与钾离子的浓度在 ca2^隋况下，对钟离子检测仍然有很高的特异性。 3、基于工具酶信号放大化学发光法检测单碱基突变 从5’_3’聚合。基于这这两种工具酶的特殊性质，本实验设计单碱罐突变位点为 T4DNA连接酶的连接位点，如突变，则能连接上，再通过DNA聚合酶的信号放 大，最终检测处化学发光信号，而未突变，则不发￡卜连接，也／1‘会聚合，则无信 Xl0叫oM。 号产生。利用此方法检测单碱基突变特异性高，并且检测限可达5．0 关键词：核酸适体；芘分子；钾离子；工具酶；单碱基突变 ASMOLECULAR OFAPTAMER STUDY IN BYRIBOZYME AIGNALAMPLIFICATION AND ANALYSIS BIoCHEMICAL ABSTRACT molecular formatsof novel moleculetools，The recognition Asakindof specific seVeraI have aresimilar．Further．the and aptamers