生物化学3-第02章核酸的结构及功能.ppt

第2章核酸的结构与功能 Structure and Function of Nucleic Acid 1868年 Fridrich Miescher 从脓细胞中提取核素。 1944年 Avery等人证实DNA是遗传物质。 1953年 Watson和Crick发现DNA的双螺旋结构。 1968年 Nirenberg发现遗传密码。 1975年 Temin和Baltimore发现逆转录酶。 1981年 Gilbert和Sanger建立DNA测序方法。 1985年 Mullis发明PCR技术。 1990年 美国启动人类基因组计划(HGP)。 1994年 中国人类基因组计划启动。 2001年 美英等国完成人类基因组计划。 一、核酸分子（DNA和RNA）的化学组成 定义 核酸中核苷酸的排列顺序。 由于核苷酸间的差异主要是碱基不同，所以也称为碱基序列。 DNA一级结构：核苷酸排列顺序 小 结 核酸包括DNA和RNA。 DNA携带遗传信息，RNA参与遗传信息的复制与表达。 核酸的基本组成单位是核苷酸。 核酸的基本结构。 DNA碱基组成——查格夫法则 亲水性的骨架位于双链的外侧。 疏水性的碱基位于双链的内侧。 DNA三股螺旋结构常出现在DNA复制、转录、重组的起始位点或调节位点，如启动子区。 第三股链的存在可能使一些调控蛋白或RNA聚合酶等难以与该区段结合，从而阻遏有关遗传信息的表达。 小 结 DNA为双链结构，RNA的结构以单链为主。 DNA的二级结构为双螺旋结构。 mRNA、tRNA、rRNA结构特点与功能。 核酸的酸碱及溶解度性质 核酸为多元酸，具有较强的酸性。 可用电泳或离子交换（色谱）进行分离 核酸的高分子性质 粘度：DNARNA dsDNA ssDNA 线性大分子（粘度高, 抗剪切力差） 沉降行为:不同构象的核酸分子的沉降的速率有很大差异，这是超速离心法提取和纯化核酸的理论基础。 一般地, DNA复性最优温度为：Tm -25℃ 第五节 核酸酶 Nuclease 本章总结 核酸包括DNA和RNA。 DNA携带遗传信息，RNA参与遗传信息的复制与表达。 核酸的基本组成单位是核苷酸。核酸的基本结构。 DNA为双链结构，RNA的结构以单链为主。 DNA的二级结构为双螺旋结构。 mRNA、tRNA、rRNA结构特点与功能。 DNA的理化性质。 思考题 真核生物基因表达的特异性 核酸的理化性质 The Physical and Chemical Characters of Nucleic Acid 第四节 核酸的一般理化性质 （在中性溶液中带负电荷）， 核酸在波长 260nm 处有强烈的吸收，是由碱基的共轭双键所决定的。这一特性常用作核酸的定性和定量分析。 一、核酸分子具有强烈的紫外吸收 以A260/A280进行定性、定量 DNA和RNA溶液中加入溴化乙锭(EB)，在紫外下发出荧光 碱基的紫外吸收光谱 DNA或RNA的定量 A260 = 1.0 相当于 50μg/ml 双链DNA(dsDNA) 40μg/ml 单链DNA (ssDNA or RNA) 20μg/ml 寡核苷酸 确定样品中核酸的纯度 纯 DNA: A260/A280 = 1.8 纯 RNA: A260/A280 = 2.0 紫外吸收的应用 二、DNA变性是双链解离为单链的过程 在某些理化因素作用下，DNA双链解开成两条单链的过程。 定义 DNA变性的本质是双链间氢键的断裂。 协同性的DNA解链 高温或极端的pH DNA的变性 核酸变性与蛋白质变性的本质一样，只涉及自身空间结构的变化，而不改变本身一级结构。 部分变性DNA的电镜图像 增色效应(hyperchromic effect)：DNA变性时其溶液OD260增高的现象。 DNA解链时的紫外吸收变化 Thermal denaturation of double-stranded DNA and RNA. Increases: 25－40%. Increases: 1.1% DNA的解链曲线 连续加热DNA的过程中以温度相对于A260值作图，所得的曲线称为解链曲线。 解链过程中，紫外吸光度的变化达到最大变化值的一半时所对应的温度。 解链温度(melting temperature，Tm) G+C 含量越高，解链温度就越高。 解链曲线的变化 Tm vs GC Content Formula for Evaluation GC% of DNA: （G+C）%=(Tm-69.3)X2.44 Marmur-Doty formula（马默多蒂关系式） 60 70 80 90 100 110