实验一、油镜的使用、细菌的革兰氏染色和细菌形态的观察PPT.pptVIP

微生物学实验 实 验 要 求 坚持课前预习 不迟到，不早退，更不能无故缺课； 严格按正确规范实验方法进行实验，作好记录； 保持实验室整洁 注意安全 事实求是地、独立地写好实验报告 实验报告 姓名、班级和学号 实验题目 实验原理（略写） 实验操作（略写） 实验结果 画图 文字描述 分析和讨论 思考题 实验一、油镜的使用、细菌的革兰氏染色和细菌形态的观察 教学目标或要求： 巩固和掌握显微镜油镜的正确使用； 学习细菌制片和单染色技术； 观察细菌的三种基本形态； 对人体上的微生物染色检查，初步建立无菌操作的概念； 学习细菌的革兰氏染色原理和方法 。 显微镜油镜的使用 油镜头的识别和重要参数 油镜物镜的工作原理 油镜的使用方法和注意事项 油镜物镜的工作原理 使用油质作为玻片与接物镜之间的介质——油浸系 可以增加显微镜的放大倍数 可以增加视野的照明度 可以增大显微镜的分辨率 油镜的使用方法和注意事项 1、用低倍镜对光。最大光圈 2、低倍镜观察（寻找观察目标）。适当缩小光圈 3、高倍镜观察（选取理想的观察目标）。 4、油镜观察：高倍镜观察后- 上升镜筒-油镜转至正下方，在载玻片上加一小滴油-小心地下降镜筒使镜头浸在油里-用粗螺旋将镜筒缓慢上升，寻找目标（物象）用细螺旋调节，使物象清晰-观察记录。最大光圈 5、观察完毕。上升镜筒，转动物镜转换器，使油镜物镜偏位。用干净擦镜纸擦去镜头上的油迹，再取一张擦镜纸醮上二甲苯擦去镜头上残留的香柏油，最后再用一张干净的擦镜纸擦去残留在镜头上的二甲苯。 6、将显微镜各部分还原，放回箱中。 细菌的制片与染色 单染色 复染色 染 料 ①碱性染料—带正电染料。其阳离子部分为发色基团，可与细胞中带负电的组分结合。如结晶紫沙黄, 甲基蓝,碱性复红等。 ②酸性染料—带负电染料。其阴离子部分为发色基团，可与细胞中带正电的组分结合。如刚果红、酸性复红 等。 ③脂溶性染料—如Sudan black。 多数染料都是中性有机盐。据着色基的不同可分为以下类型： 涂片 干燥 固定 染色1~2min 水洗、吸干 镜检 细菌的单染色 革兰氏染色法：是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。 革兰氏染色法基本原理 G—菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经复红复染后就成红色。 G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。 1、活材料：培养24小时的大肠杆菌和苏云金芽孢杆菌。 2、染色液和试剂：结晶紫、碘液、95%酒精、石炭酸复红 、蒸馏水、香柏油。 3、器材：载玻片、接种杯、酒精灯、擦镜纸、显微镜。 实验材料 （1）涂片 （2）晾干 （3）固定 （4）结晶紫染色：加适量（以盖满细菌涂面）的结晶紫染色液染色1min；水洗：倾去染色液，用水小心地冲洗。 （5）媒染：碘液，媒染1min；水洗：用水洗去碘液。 方法与步骤 （6）脱色：将玻片倾斜，连续滴加95%乙醇脱色15—20s至流出液无色，立即水洗。 （7）复染：滴加复红复染1min；水洗：用水洗去涂片上的复红染色液。 （8）晾干：将染好的涂片用吸水纸吸干。 （9）镜检：镜检时先用低倍，再用高倍，最后用油镜观察，并判断菌体的革兰氏染色结果。 革兰氏染色法 操作步骤 涂片——干燥——固定 结晶紫1min——水洗 I-KI 1min——水洗 95%乙醇脱色约15~20s——水洗 沙黄或石炭酸复红 1min——水洗 干燥——镜检 革兰氏阴性杆菌 革兰氏阳性杆菌 * * 菌体蛋白的等电点pI为4～5,在pH﹥pI的条件下，带负电。 几