TAIL-PCR课件.pptVIP

TAIL-PCR技术的原理 反应条件和引物设计 特点 应用 结合利用TAIL-PCR和抑制PCR的原理? 利用5’带尾巴的高简并倍数的LAD引物在靶序列上创造结合位点，并抑制两端均为LAD引物的非特异产物的扩增 利用5’带尾巴的第1轮特异引物抑制短的特异产物的扩增 利用nested PCR提高扩增产物特异性 利用nested PCR提高扩增产物特异性 C D 利用2轮高温、1轮低温交替的超级PCR循环提高特异产物的扩增效率，降低非特异产物的比 利用高稀释倍数降低非特异产物在下一轮作模板的比例 抑制PCR的原理：当PCR产物两端有反向重复序列时，可配对形成茎环结构。茎的形成会影响其与引物的结合，从而降低扩增效率。茎的长度越长、环的长度越小抑制作用就越强。 1. 引物设计 2. 退火温度 3. 反应循环程序 特异性引物 (specific primer ，SP) 与已知序列互补的巢式序列特异性引物 较高的熔点温度, Tm=58-68℃ 随机简并引物（Arbitrary degenerate ，AD) 按照物种普遍存在的蛋白质的保守氨基酸序列, 设计长度相对比较短 较低的熔点温度, Tm =44-48℃ 较长的随机简并引物（LAD) 高严谨性循环 (热不对称) 退火温度60- 68 ℃ 较低严谨性循环