病理学新技术进展PPT.ppt

显微切割效果 显微切割技术在肿瘤研究中的应用。(1)肿瘤克隆性分析。要了解某种肿瘤是否是单克隆性，必须要获取单纯肿瘤细胞进行分析，其内不能有其他细胞，而且，还要在同一肿瘤的不同部位或不同结节内的细胞进行比较，才能获得准确的信息。 (2)肿瘤发生和演变过程中各阶段细胞基因改变的比较。 (3)肿瘤内酶活性的定量检测。免疫组化可以检测某种物质在细胞内的分布情况，但不能进行定量测定，而利用显微切割技术可以得到纯净的细胞用于定量酶细胞化学分析。 显微切割技术优点在于：可以获取纯净、单一的待测细胞，不仅可以定性研究，还可以进行定量研究；获取的细胞能反映肿瘤组织在体内生长的实际情况；用于显微切割的切片制作简单。缺点是购买显微切割的仪器费用昂贵。 四、远程病理(Telepathology) 远程病理是近年随着Internet网络技术发展而产生的新的外科病理诊断形式，对诊断病理的发展，特别是中小医院、边远地区的病理诊断水平的提高有很大的帮助。 远程病理目前主要的应用包括：远程诊断；图像数据库；远程定量病理；远程病理质量评价。 判定小细胞癌原发部位的免疫组化标记物 有几种可用的标记物： ? CK20：Merkel细胞癌为阳性（原发涎腺肿瘤也可阳性） ? TTF-1：原发肺小细胞癌阳性 4、癌预后因子 激素受体：乳腺癌 增殖标记物（Ki-67）是某些肿瘤的预后因子 癌基因与抑癌基因产物:c-erbB2, Rb,p16, p27, p21, ALK1. E R P R Ki-67 C-erbB-2 PCNA 5、确定感染 免疫组化可判定某些感染的实质 （有时病毒包含体难以发现） Herpes CMV HPV HBsAg Pneumocystis HPV HBsAg 6、宫内孕的诊断  宫腔刮出物中证实有胎儿成分可有效的排除输卵管妊娠。 如果不见绒毛，角蛋白染色可显示蜕膜细胞中的滋养叶细胞，从而证实为宫内孕。 免疫组织化学的应用 免疫组织化学还有其它许多新颖和可想象的用途。 二 组织芯片技术(tissue microarray) 组织芯片技术使病理医生第一次有可能同时对几百个、甚至上千种正常或疾病以及疾病发展不同阶段的病理或生理状态下的组织样本，进行某一个或多个特定的基因，或与其相关的基因产物的研究。组织芯片技术可以与DNA、RNA、蛋白质、抗体等技术相结合，与传统的病理学技术、组织化学及免疫组化技术相结合，在基因、基因转录和相关基因产物生物学功能三个水平上进行研究。 组织芯片技术的基本原理 组织芯片又称组织微阵列（tissue microarray）, 1998年由Kononen等在cDNA微阵列的基础上发明的一种特殊的生物芯片，是继基因芯片和蛋白芯片之后生物芯片家族的又一新成员。组织芯片的原理是根据不同需要，利用特殊的仪器，将多个（病例）小组织片高密度的、整齐排列固定在某一固相载体上（载玻片、硅片、聚丙烯或尼龙膜等），而制成微缩的组织切片。 然后可以用各种酶、同位素或荧光标记的不同基因、寡核苷酸、抗体在微缩组织切片上进行杂交和标记染色，最后在显微镜（包括激光共聚焦显微镜等）下获取图像信息（或通过计算机处理所获的信息），以研究目的基因或基因产物在不同组织之间的表达差异。 该技术的最大潜在作用是将基因、蛋白水平的研究与组织形态学相结合，使应用同一实验指标，同时快速研究大量不同组织样本（高通量、多样本）的设想成为现实，减少了实验误差，几十倍、上百倍的提高组织病理学研究的效率，节约实验材料和试剂，同时使实验结果有更可靠的可比性，对于原始病理资料的保存和大量样本的回顾性研究具重要的意义。 组织芯片技术的制备目前主要依靠机械化芯片制备仪来完成。 制备好的组织芯片的切片 上图高倍 显微镜下的图像 组织芯片的应用范围很广，如：研究目的基因在不同病变（肿瘤）间的表达差异、寻找疾病新基因[疾病（肿瘤）中新基因、突变体与基因多态性的检测]、药物的筛选、疾病的病理诊断及质量控制等。 组织芯片技术的优点 组织芯片多项内容研究 组织芯片快速、高效的价值 大样本病理资料回顾性研究 节约试剂、降低成本 肿瘤诊断与分型 有利于标准化研究 例如，在研究混合性胶质瘤的过程中，肿瘤出现少枝胶质细胞成分和星形细胞成分的混合，那么这两种成分是同源性的，即是否由一个母细胞分化来的，还是异源性的，由不同细胞同时分化成的混合性肿瘤，要分清楚这些，在以前是不可能的，因为我们得不到混合肿瘤