第19章药物研究生物化学基础.pptVIP

第十九章药物研究的生物化学基础 第一节 生物药物制造的生物化学基础 一、生物药物制备方法的特点 （1）目的物存在于组成非常复杂的生物材料中 （2）目的物在生物材料中含量极微 （3）生物活性成分离开生物体后，易变性破坏 （4）生物药物制造工艺设计理论性不强 （5）生物制药工艺多采用“逐级分离”法 （6）生物药物的均一性检测与化学上纯度概念不完全相同。 生物药物分离的主要原理： 1. 根据不同组分分配率的差别进行分离 萃取 分配层析 吸附层析 盐析 结晶 二、生物合成技术 生物合成是利用生物细胞的代谢反应（更多的是利用微生物转化反应）来合成化学方法难于合成的药物或药物中间体。 微生物转化反应: 是利用微生物的代谢作用来进行某些化学反应，确切地说就是利用微生物代谢过程中某种酶对底物进行催化反应，以生成所需要的活性物质。 半合成药物是指一个药物其部分结构由天然资源得到，然后用化学合成法制得最终产品或应用微生物转化将化学合成的中间产物，通过某些生物合成步骤来解决药物合成中难于进行的化学反应，从而获得最终有效化合物。 三、生物技术 生物技术（biotechnology）又称生物工程（bioengineering），是利用生物有机体（动物、植物和微生物）或其组成部分（包括器官、组织、细胞或细胞器等）发展新产品或新工艺的一种技术体系。 基因工程 细胞工程 酶工程 发酵工程 （一）目的基因的获取 1. 化学合成法 要求：已知目的基因的核苷酸序列或其产物的氨基酸序列 。 2.基因组DNA文库(genomic DNA library) 3. cDNA文库(cDNA library) 4. 聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR) 能自主复制； 具有两个以上的遗传标记物，便于重组体的筛选和鉴定； 有克隆位点（外源DNA插入点），常具有多个单一酶切位点，称为多克隆位点； 分子量小，以容纳较大的外源DNA。 DNA重组技术的主要应用： 1.运用DNA重组技术大量生产基因工程药物。 2.定向改造生物的基因结构，构建高产菌株，用于改造传统制药工业。 3.用于基础研究，用于基因结构与基因组功能的调节研究，用于分子杂交等。 第二节药物质量控制的生物化学基础 一、药物质量控制的常用生化分析法 （一） 免疫分析法 1. 免疫扩散法 2. 免疫电泳法 3. 放射免疫测定法（RIA） （二） 电泳分析法 （三） 酶法分析 1.终止反应法 2.连续测定法 3.循环放大分析法 二、生物药物质量控制的生化分析方法 （一） 多肽与蛋白质类药物的主要分析方法 1. 蛋白质药物的纯度分析 聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE) SDS毛细管电泳(CE) 等电聚焦(IEF) 高效液相色谱法 (HPLC) 2. 多肽与蛋白质分子量的测定 使用较多的是超速离心法，凝胶层析法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法等。 3. 蛋白质的定量测定 （1） 物理性质：紫外分光光度法，折射率法， 比浊法。 （2） 化学性质：凯氏定氮法，双缩脲比色法， Folin-酚法，BCA法。 （3） 染色性质：考马斯亮兰G-250结合法、银染、 金染。 （4） 其他：荧光激发。 4.胶体金比色法 胶体金是一种带负电荷的疏水性胶体，加入蛋白质后，红色转变为蓝色，595nm处测定样品的吸收值，计算含量。 5. 生物质谱法： 多肽和蛋白质的分子量可用MALDI/MS（基质辅助激光解吸离子化质谱法）或ESI/MS（电喷雾离子化质谱法）直接测定，用质谱法测定蛋白质的分子量简便，快速、灵敏、准确。 （二） 核酸类药物的主要分析方法 1. 紫外分光光度法 ： 测定RNA与DNA含量260nm 2. 地衣酚显色法测定RNA含量 3，5-二羟甲苯 3. 二苯胺法测定DNA含量 （三） 酶类药物的分析 酶类药物的主要质量指标是它的催化活力。 第三节药理学研究的生物化学基础 4．受体-转录因子型 （三）跨膜信号转导与细