微生物与制药3PPT课件.ppt

? 稀释法 稀释法有液体培养基连续稀释法和固体稀释法（斜面法）两种。这两种方法都可以用来测定药物的最小抑菌浓度（MIC）：是指该药物能抑制细菌生长的最低浓度，通常用μg∕ml或U/ml表示。 具体的液体培养基连续稀释法见书本，固体培养基连续稀释法，又可分为平板法和斜面法。 常用方法1.?棋盘格法 棋盘稀释法是常用的定量方法，首先分别测定拟联合的抗菌药物对检测菌的MIC。 药物的稀释分别在方阵的纵列和横列进行，这样在每管（孔）中可得到不同浓度组合的两种药物混合液。 接种菌量为5×105CUF／ml，35℃孵育 18h后观察结果。计算部分抑菌浓度 （FIC）指数 0．5为协同作用； 0．5－1为相加作用； 1～2为无关作用； ＞2为拮抗作用。 意义 目的在于：①治疗混合性感染； ②预防或推迟细菌抗生素耐 药性的发生； ③联合用药可以减少剂量以 避免达到毒性剂量； ④联合用药比单一用药时效 果更好。 4.???对照试验 为确保试验结果的科学性和准确性，试验时应同时进行各种对照试验。 试验菌对照：在无药情况下，应能在培养基内正常生长。 溶剂及稀释液对照：配制抗菌药物时所用的溶剂及稀释液均应无抗菌作用。 已知药物对照：应使已知抗菌药物对标准菌株出现抗菌效应。 ? 实验步骤: 1、用无菌棉拭子沾取小量待测菌液，均匀涂布 平板，待稍干后， 用无菌眼科镊将各种药敏 片分别平贴在平板培养基表面，每板4-6个， 相互间应有一定距离（15mm）。 2、置37℃ ，培养8-12h，观察结果。 3、结果判定：观察有无抑菌圈 及测量其直径，按下表判定 对药物的敏感性。 中国药典2000版二部微生物限度标准(单位：个/g或个/ml) 活螨的检验 　用于口服、创伤、粘膜和腔道的药品均不得检出活螨 直接观察法 漂浮法 分离法 　作　业 现有青霉素、磺胺嘧啶钠注射液，如何分别对这两种药物进行无菌检查？ 有一中药丸剂（银翘解毒丸），如何进行该药的微生物学检查？ * 辽阳职业技术学院制药微生物 微生物与药学 * 辽阳职业技术学院化工系制药微生物 微生物与药学 药物制剂的微生物学检查 1.掌握药物的体外试菌试验方法（琼脂扩散法和系列稀释法）， 了解药物的体内抗菌实验。 2.掌握一般灭菌制剂的无菌检查方法和原理，熟悉特殊药品的 无菌检查法。 3.掌握非灭菌药物的微生物总数测定方法，熟悉药品的大肠杆菌 检查方法。 4.了解一般药品的沙门菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和破 伤风杆菌的检查方法。 药物的抗菌试验 药物的体外抗菌试验包括用于区别药物是抑菌或杀菌药物的抑菌试验； 测定药物杀菌活性的杀菌试验；以及检查两种药物联合作用的联合抗菌试验等。 一般抑菌药物只能抑制微生物生长，不能杀死微生物，抑菌药物被除去，微生物又可以恢复继续生长。杀菌药物能杀死微生物，杀菌药物除去后，微生物仍然不能生长。 药物的抑菌作用或杀菌作用是在一定条件下相对而言的。在我们检测时，药物的作用受到用药时培养基的组成、温度、PH值及所用的菌种、菌量等各个因素有关。 虽然说体外抗菌试验有很多优点，但是由于体外抗菌试验没有复杂的体内因素影响，因此药物体外抗菌试验和体内抗菌试验可能会出现不一致的结果。所以，一般我们在体外对药物进行测试后，有效的药再要进行体内试验，如果体内试验再次证实此药有效的话，才能推荐应用到临床。 第一节 药物的体外抑菌试验 一、药物的体外抑菌试验 （一）体外抑菌试验 药物的体外抑菌试验是常用抗菌试验方法，其中最常用的方法用系列稀释法和琼脂扩散法。 2.琼脂扩散法 利用药物在琼脂培养基中扩散，并在一定浓度范围内抑制细菌生长的原理进行的。一般用于细菌和酵母菌的药敏试验。 1.?? 滤纸片法（纸碟法） 滤纸片法是最常用的方法，适用于新药的初筛试验（初步药物是否有抗菌作用）及临床的药敏试验（细菌药物第三性试验、以便选择用药）。滤纸片分湿、干两种，可以在试验时用无菌纸片沾取药物溶液放在含菌的平板表面，也以预先做成一定浓度的干燥纸片。一般来说预先做成的干燥纸片实用一些而且准确一些。 干燥纸片的制备方法：选用吸水力强而且质地均匀的滤纸，用打洞机制成6mm直径的圆纸片，120℃干燥灭菌2小时。然后把配制好的各种适宜浓度的抗生素溶液，每100张纸片加入0.5ml药液，使它均匀浸润，放在无菌平皿中，37℃，使它干燥，分装小瓶中，