生物药物分析与检验 氨基酸多肽和蛋白质类药品检验PPT课件.pptVIP

第二节 多肽因子类和蛋白质类药品检验 至少应用两种以上的方法，而且是两种不同分离机理的方法来判定蛋白质的纯度才比较可靠。 常发现某一样品在凝胶过滤中是纯的，而在离子色谱中却分辨为二个组分，反之亦然。 又如一种样品用凝胶过滤法和SDS电泳证明是纯的，但这仍不充分，因为这两者机理相同。 第二节 多肽因子类和蛋白质类药品检验 三、蛋白质类药物的鉴别和检查 1、蛋白质类药物的鉴别 蛋白质类药物可根据其各自的物理、化学性质、生理作用等采用不同的方法进行鉴别。 （1）茚三酮反应 组成蛋白质的氨基酸都能与茚三酮反应生成紫色化合物，因此蛋白质也有此反应，这是蛋白质鉴别的最常用方法。 （2）福林酚反应或双缩脲反应 这两种常用来测定蛋白质的含量，但有时也用于蛋白质的鉴别。 （3）紫外吸收 由于组成蛋白质的氨基酸中，酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸在紫外区的光吸收特性，因此可利用此种特性鉴别蛋白质。 第二节 多肽因子类和蛋白质类药品检验 五、蛋白质含量测定和效价测定 1、蛋白质含量测定 蛋白质的定量可用化学方法如凯氏定氮法、双缩脲法、福林酚法、紫外光吸收法来测定；也可用染色法，如氨基黑、考马斯亮蓝测定；此外还可用荧光激发、氯胺T、放射性核素计数等灵敏度较高方法。 上述方法中凯氏定氮法、福林酚法、紫外光吸收法最为常用，它们操作简单、设备便宜。 第八章 氨基酸、多肽因子和蛋白质类药品检验 基本要求： 掌握氨基酸定性鉴别的方法，熟悉氨基酸特殊杂质及安全性检查，掌握氨基酸含量测定方法，掌握多肽因子类药物的定性鉴别方法，熟悉多肽因子类药物的检查方法，掌握多肽因子类药物生物效价的测定方法，掌握蛋白质类药物的鉴别和检查方法，掌握蛋白质含量测定和效价测定方法，了解几种氨基酸、多肽因子和蛋白质药物的质量分析过程。 基本内容 第一节 氨基酸类药品检验 第二节 多肽因子类和蛋白质类药品检验 第三节 几种氨基酸、多肽和蛋白质药物的质量分析 第一节 氨基酸类药品检验 氨基酸是治疗蛋白质代谢紊乱、蛋白质缺损所引起的一系列疾病的重要生化药物，也是具有高度营养价值的蛋白质补充剂，有着广泛的生化作用和临床疗效。 目前氨基酸及其衍生物临床应用不断发展和扩大，创制了一些新的生化药物。 如甲基酪氨酸治疗嗜铬细胞瘤 氧苯丙氨酸用于类癌瘤综合征 偶氮丝氨酸治疗白血病 乙酰羟脯氨酸用于治疗类风湿关节炎 第一节 氨基酸类药品检验 氨基酸为白色晶状体，熔点很高，多在熔融时分解，都能溶解在强酸强碱中，形成的盐多能溶于水。 氨基酸在等电点（pI）时溶解度最小，最稳定。 中性pI值在5～6.3左右。 酸性pI值在2.8～3.2左右。 碱性氨基酸的pI值在7.6～10.8左右。 第一节 氨基酸类药品检验 一、氨基酸的定性鉴别 旋光度、熔点、溶解度、纸层析、氨基酸自动化分析、气相色谱等均可作为氨基酸鉴别的依据。 1、化学鉴别法 氨基酸的鉴别最常用的方法是根据所有氨基酸均能与茚三酮显蓝紫色。 采用茚三酮显色法，中国药典（2010年）二部对所收载的氨基酸类药物大多采用此方法进行鉴别。 1：酪氨酸 2：色氨酸 3：苯丙氨酸。 第一节 氨基酸类药品检验 这三种氨基酸可以通过紫外吸收光谱加以鉴别。 精密称取酪氨酸、色氨酸、苯丙氢酸各适量。 用水制成每1mL含20μg（色氨酸）、40μg（酪氨酸）、200μg（苯丙氨酸）。 在波长230～300nm测定各氨基酸的吸收光谱，如右图。 第一节 氨基酸类药品检验 （2）红外吸收光谱图 氨基酸在红外区都有特性图谱，可以通过与标准氨基酸图谱比较作为氨基酸的鉴别依据。 所得的吸收图谱各主要吸收峰波长和各吸收峰间的相互强度关系均应与对照的图谱一致。 第一节 氨基酸类药品检验 3、薄层色谱鉴别法 在薄层板上点样，通过与标准氨基酸对照而鉴别氨基酸。 （1）薄层板的制备 第一节 氨基酸类药品检验 （2）十一种氨基酸混合液（色、蛋、亮、异亮、甘、赖、苏、缬、苯丙、组、精）与对照液的制备。 第一节 氨基酸类药品检验 （3）点样、展开和显色 吸取混合液和对照液各3μL，分别点于同一薄层板上。 以正丁醇-水-异丁酸-醋酸（50︰50︰5︰7）之上层作展开剂，进行单向三次展开，展开约15cm，每次必须待溶剂挥发尽后，再进行下一次展开。 喷以显色剂（吲哚醌1g，溶于100mL无水乙醇和10mL冰醋酸中）置100℃干燥5～10min至显色完全为止。 第一节 氨基酸类药品检验 本层析系统中，由于分离的程度与各种氨基酸显出不同的颜色，可以区别十一种氨基酸。 用茚三酮-硝酸钠试剂亦能显出不同颜色的色斑，且灵敏度较高。 第一节 氨基酸类药品检验 4、旋光性 除甘氨酸外，所有的天然氨基酸都有旋光性，且每种氨基酸的比旋度不同，因此，可以用比旋度作为氨基酸药物的鉴别指