食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌PPT课件.ppt

食品卫生微生物学检验阪崎肠杆菌检验GB/T4789.40-2008 曾 静 北京出入境检验检疫局 2009.3.20 阪崎肠杆菌检验GB/T 4789.40-2008 一、采标情况 二、适用范围 三、操作过程 1 第一法 阪崎肠杆菌的检验 2 第二法 阪崎肠杆菌的计数 阪崎肠杆菌检验GB/T 4789.40-2008 一、采标情况 第一法 修改采用ISO /TS 22964. 2006《乳和乳制品中阪崎肠杆菌》 第二法 修改采用FDA《婴儿配方奶粉中阪崎肠杆菌的分离和计数》 阪崎肠杆菌检验GB/T 4789.40-2008 一、采标情况 本标准与ISO方法的主要区别： — 培养温度由35 ℃±1 ℃改为36℃±1 ℃ ； —阪崎肠杆菌选择性培养基由ESIA改为DFI，培养温度由44 ℃±1 ℃改为36℃±1 ℃ ； — 增加了第二法，作为阪崎肠杆菌的MPN定量检验方法 阪崎肠杆菌检验GB/T 4789.40-2008 二、适用范围 适用于婴幼儿配方奶粉、乳和乳制品及其原料中阪崎肠杆菌的检验 阪崎肠杆菌介绍 阪崎肠杆菌（Enterobater sakazakii）属肠杆菌科肠杆菌属，革兰染色阴性杆菌。阪崎肠杆菌在自然界分布广泛，繁殖迅速，但不耐热，可通过巴斯德消毒法杀灭。阪崎肠杆菌属条件致病菌，在一般情况下，不对人体健康产生危害，但对于免疫力低下者和婴幼儿、新生儿，尤其是早产儿、低体重儿可以致病。感染来源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶粉，人与人之间无传染性。 阪崎肠杆菌介绍 临床表现 　多数患儿临床症状轻微且不典型，易被忽略。严重者可引起坏死性小肠结肠炎、败血症、脑膜炎等。 （一）全身症状：发热，新生儿可表现为体温不升、精神萎靡、拒乳、黄疸加重，面色发灰、皮肤发花甚至出现休克。 （二）消化系统症状：可有呕吐、腹胀、腹泻、粘液血便，肠鸣音减弱甚至消失，严重时可发生肠穿孔和腹膜炎。 （三）神经系统症状：烦躁、哭声尖直、嗜睡甚至昏迷，可出现凝视、惊厥，查体可有头围增大、颅缝裂开、前囟张力增高、脑膜刺激征阳性。 阪崎肠杆菌介绍 易感人群: 免疫力低下者和婴幼儿、新生儿，尤其是早产儿、低体重儿可以致病。感染来源主要是受阪崎肠杆菌污染的奶粉，人与人之间无传染性。 阪崎肠杆菌介绍 1、阪崎肠杆菌在自然界分布广泛，在水、土壤、食物、排泄物等中都能够检出。细菌不耐热，加热到72℃持续15秒就可以杀灭。细菌不在人与人之间传播。 2、阪崎肠杆菌在一般情况下不对人体健康产生危害，但对于新生儿，尤其是早产儿、低体重儿可以致病。 3、绝大多数患者为轻症病例，表现为轻微的消化道症状，恢复良好；重症病例罕见但病死率高。对于发现的病例应及时报告。 阪崎肠杆菌检验GB/T 4789.40-2008 三、操作流程 第一法 阪崎肠杆菌的检验 阪崎肠杆菌检验GB/T 4789.40-2008 阪崎肠杆菌检验GB/T 4789.40-2008 5.3鉴定 ：可用API20E或VITEK进行鉴定 5.4 报告：报告100g（mL）中检出或未检出阪崎肠杆菌 阪崎肠杆菌检验GB/T 4789.40-2008 三、操作 第二法 阪崎肠杆菌的计数 6.1 样品的稀释 ：固体或半固体样品，无菌称取样品100g,、10g和1g样品各3份，加入到预热到44℃的900mL、90mL和9mL的BPW培养液中，36℃±1 ℃，培养 18 h ± 2 h 6.3 报告：根据阳性管数查MPN表，报告每100g(mL)样品MPN数。 * * 100 g(100 mL) 样品+900mLBPW稀释液，均质 1 mLBPW 增菌液+10 mL mLST 划线接种DFI琼脂 挑取绿色菌落 接种TSA平板 36℃±1 ℃ 18 h ± 2 h 44℃±0.5 ℃ 24 h ± 2 h 36℃±1 ℃ 24 h ± 2 h 生化鉴定 报告 挑取黄色菌落 25℃±1 ℃ 48 h ± 4 h 阪崎肠杆菌在三种选择性培养基上的特征 ESIA CES DFI 5.2 分离：阪崎肠杆菌在选择培养基上的特征菌落 DFI 培养基