大学生物遗传学：基因的表达与调控(上) --原核基因表达调控模式PPT.ppt

操纵序列的这种反向重复对称正好与由四个相同亚基组成的乳糖阻抑物的内部对称相匹配。当乳糖缺乏时，阻抑物占据了操纵序列的结合位点， RNA聚合酶不能通过操纵序列。 乳糖阻抑物和RNA聚合酶能够同时结合到乳糖启动子和操纵序列位点上。乳糖阻抑物使聚合酶结合到乳糖启动子上的能力增加了两个数量级。当乳糖阻抑物结合到0lac操纵序列上时，聚合酶是结合到相邻的Plac启动子序列上的，只是不能通过之。 当缺少诱导物时，乳糖阻抑物阻碍了几乎全部的lacZYA的转录而使之保持很低的转录水平。将乳糖加入细胞中后，细胞本身所含的低量的透性酶使它能吸收乳糖，β-半乳糖苷酶则催化一些乳糖转化为异乳糖。 异乳糖可以作为诱导物结合到乳糖阻抑物上。从而引起阻抑物四聚体构象的变化，从而降低其对乳糖操纵序列的亲和力，乳糖阻抑物从操纵序列上脱离下来可以使聚合酶 (已经位于邻近的启动子上)迅速开始lacZYA基因的转录。 因此，加入乳糖或合成诱导物如异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)能非常迅速地刺激乳糖操纵子结构基因的转录。若随后将诱导物清除掉则会导致诱导性转录的立即终止，这是因为游离的乳糖阻抑物会立即重新占据操纵序列上的位点，而lac ZYA RNA的转录物是极不稳定的。 Plac启动子不是强启动子。其原因是Plac及其相关的启动子没有强的-35序列，其中一些甚至只有弱的-10的共有序列。为了实现高水平的转录，它们需要一种特定的激活蛋白即cAMP受体蛋白(CRP)的活化。 cAMP即环式AMP，其在生物表达调控过程中起着重要作用。葡萄糖的降解代谢会抑制一些操纵子的转录。cAMP在细胞中的增加对这些操纵子的转录是有利的。葡萄糖降解物能抑制细胞内cAMP产生。 这是因为ATP是cAMP的直接代谢前体，担任这种转化的酶是腺苷酸环化酶(adenylcyclase)，此酶受葡萄糖代谢降解物的直接抑制从而造成cAMP不能产生。 CRP也可称为分解代谢激活蛋白或CAP是以以二聚体形式存在的。当葡萄糖存在时，大肠杆菌不需要像乳糖这样的替代碳源。因此代谢操纵子如乳糖操纵子通常不被激活。原因是当葡萄糖存在时会降低细胞内cAMP的水平， CRP自身不能独立与DNA结合；当葡萄糖缺乏时，大肠杆菌细胞内cAMP水平上升，CRP结合到cAMP上。CRP-cAMP复合物可结合到紧邻RNA聚合酶结合位点上游的乳糖操纵子的启动子Plac上游。能使DNA双螺旋发生弯曲，有利于形成稳定的开放型启动子-RNA聚合酶结构，使转录效率提高50倍。 而阻遏物则是一个抗解链蛋白(antimeltingpmte五n)，阻止形成开放结构，从而抑制RNA聚合酶的功能。 lac 操纵子小结 通常情况（葡萄糖供应正常）阻遏蛋白与操纵序列结合，基因不转录。 细胞外的乳糖通过透性酶吸收到细胞内；细胞内的β-半乳糖苷酶将乳糖转变为异乳糖。异乳糖结合到乳糖阻抑物上使之从操纵序列上脱离，聚合酶迅速开始lacZYA基因的转录。这就是负控诱导。 然而，还需要细菌生长系统中缺少葡萄糖，使cAMP含量增加，才有足够量的cAMP与CRP结合形成CRP-cAMP复合物结合于Plac上游。使DNA双螺旋发生弯曲，转录才可以有效地进行。 6.3 色氨酸操纵子与负控阻遏系统 色氨酸操纵子包括色氨酸合成途经中相关的5个结构基因。该操纵子编码一个转录单元，即从色氨酸启动子Ptrp和操纵基因位点Otrp向下游转录出7kb的转录物。像许多涉及氨基酸生物合成的操纵子一样，色氨酸操纵子也具有当细胞内缺乏生物合成途径所需的色氨酸时，可使这些基因协同表达的进化系统。 色氨酸阻抑物 独立的操纵子trpR编码的产物---色氨酸阻抑物，能与色氨酸操纵子的操纵基因位点特异性相互作用。操纵基因序列是色氨酸阻抑物的结合位点。操纵基因序列有部分对称序列。操纵基因的部分对称序列与色氨酸启动子序列在-21和+3碱基之间重叠。中心结合区是18个碱基的回文结构。色氨酸阻抑物能结合色氨酸并且只有当它与色氨酸结合形成复合物后才能结合到操纵基因上。 第六章 基因的表达与调控(上) －－原核基因表达调控模式 6．1 原核基因表达调控总论 6．2 乳糖操纵子与负控诱导系统 6．3 色氨酸操纵子与负控阻遏系统 6．4 转录后调控 原核生物暴露在环境中，食物供应无保障，只有根据环境条件的改变合成各种不同的蛋白质，使代谢过程适应环境的变化，才能维持自身的生存和繁衍。它有一套准确地调节基因表达和蛋白质合成的机制。 如果每个基因等同翻译，每一个多肽应有相同的拷贝数。 结论是否定的，基因的表达是被控制的。有些蛋白质的数目相当固定，另一些则变化很大；50种核糖体蛋白数量十分稳定。糖酵解体系的酶数目也极恒定。DNA聚合酶、RNA聚合酶等代谢过程中十分必需的酶或蛋白质（组成型合成蛋白）的合成速率不受环境变化或代