实验 肠道致病菌的分离鉴定PPT.pptVIP

* 实验四肠道致病菌分离鉴定 病原生物学教研室 Content 示教： 主要肠道杆菌，大肠杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌及变形杆菌的形态、染色性 主要肠道杆菌的培养特性：SS平板/EMB平板 主要肠道杆菌的生化反应：双糖、尿素分解反应 操作： 肥达反应 粪便肠道致病菌的分离和鉴定——血清学 (*续) 录像： 厌氧菌 肠道杆菌的分类 肠杆菌科 志贺菌属 埃希菌属 沙门菌属 克雷伯菌属 变形杆菌属 ETEC, EIEC, EPEC, EHEC, EAEC 痢疾、福氏、 鲍氏、宋内 伤寒，副伤寒， 猪霍乱，肠炎 肠道杆菌的基本特征 形态结构相似 培养要求不高 生化反应活跃 抗原结构复杂 抵抗力不强 易发生变异 粪便标本肠道致病菌鉴别流程 标本 鉴别培养基 （SS培养基） 生化反应 （双糖管） 血清学鉴定 SS 平板挑取可疑菌落2个 (无色,透明,小菌落) 接种双糖管 培养,观察 双糖管 发酵乳糖 H2S试验 发酵葡萄糖(产酸产气)及动力 上层：乳糖,Fe2+ 固体 下层：葡萄糖 半固体 指示剂:酚红（pH6.8-8.4, 黄 红） 致病菌红色 非致病菌黄色 ▼ 观察： 乳糖 葡萄糖 动力 硫化氢 尿素酶 大肠埃希菌 ＋ + － 痢疾志贺菌 － + － － 伤寒沙门菌 － + + +/－ 副伤寒杆菌 － + + － 变形杆菌 － + + + 红色 黄色 双糖管结果观察 黄色 黄色 可疑肠道致病菌 大肠埃希菌 双糖管接种方法 穿刺—斜面接种法 肥达试验 原理： 伤寒沙门菌菌体O 抗原 伤寒沙门菌鞭毛Ｈ抗原 甲型副伤寒沙门菌鞭毛H抗原 肖氏沙门菌鞭毛Ｈ抗原 已知抗原 病人血清中的未知抗体 凝集 肥达试验 操作： 病人血清 生理盐水 微量板 1 2 3 4 5 6 7 8 伤寒O 0.2ml 0.2ml 伤寒H 0.2ml 0.2ml 副甲H 0.2ml 0.2ml 肖氏H 0.2ml 0.2ml 1:20 1:40 1:80 1:160 1:320 1:640 1:1280 生理盐水 混匀 Ag加样方向 抗原 *