4DNA的生物合成与重组PPT.ppt

冈崎片断的连接 5? 5? DNA Pol-Ⅰ RNA酶 水解RNA引物留下空隙 填补引物水解后留下的空隙，保留缺口 DNA连接酶 DNA连接酶 ATP ADP+Pi 5? 5? DNA连接酶 5? 5? P 形成磷酸二酯键连接片段之间缺口 二、真核生物的DNA生物合成 细胞周期（Cell cycle） 指细胞分裂的时相变化。 典型的细胞周期分为4期： G1期（DNA合成前期） S期（细胞分裂的合成期），合成DNA G2期（ G2期主要合成一些与有丝分裂中新细胞形成所必需的物质） M期（细胞染色体形成并发生细胞分裂，新细胞在此期形成） （一）真核生物复制的起始 复制起始也是打开复制叉形成引发体并合成RNA引物，但详细机制不清楚。 3 领头链 随从链 引物 核小体 （二）真核生物复制的延长 当随从链延长了一个或多个核小体的长度后要重新合成引物 亲代DNA 复制中岡崎片段的连接，复制子之间的连接都可以在线性DNA内部完成。 染色体DNA呈线状，复制在末端停止。 染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物，去除后留下空隙。剩下的DNA单链要填补成双链，否则会被核内的DNase水解变短。 （三）真核生物复制的终止 线性DNA复制的末端 复制完成后子链末端留下空隙，母链成单链 端粒(telomere) 指真核生物染色体线性DNA分子末端的结构。形态学上染色体DNA末端膨大成粒状。 结构特点 由末端单链DNA序列和蛋白质构成。 末端DNA序列是多次重复的富含G、T碱基的短 序列。仓鼠和人类端粒DNA末端都有（TnGn）x重复序列。 功能 维持染色体的稳定性 ? 维持DNA复制的完整性 端粒酶(telomerase) 组成 端粒酶RNA (human telomerase RNA, hTR) 端粒酶协同蛋白 (human telomerase associated protein 1, hTP1) 端粒酶逆转录酶 (human telomerase reverse transcriptase, hTRT) 功能 提供RNA模板、催化逆转录 端粒酶通过爬行模型的机制维持染色体的完整。 端粒酶的RNA 端粒DNA末端 1、端粒酶靠hTR（AnCn）x 与母链DNA端粒结合 内在模板RNA 2、以端粒酶RNA为模版，逆转录，延长DNA母链 3、端粒酶移位、空出RNA模板，再次延长母链，同时DNA母链反摺利于下游复制延伸。 端粒酶的RNA 4、延伸足够长度后端粒酶脱离母链，代之以DNA-Pol 。此时母链3′-OH反折，同时作为引物和模板，完成末端双链复制。 端粒酶的RNA DNA-Pol 逆转录和其他复制方式 双链DNA是大多数生物的遗传物质。 某些病毒的遗传物质是RNA。 少数低等生物如M13噬菌体的感染型只含有单链DNA。 染色体外DNA（原核生物的质粒、真核生物的线粒体）都采用特殊的方式复制。 逆转录或反转录(reverse transcription) 逆转录酶(reverse transcriptase) 全称：依赖RNA的DNA聚合酶。 逆转录酶 一、逆转录病毒和逆转录酶 信息流动方向 逆转录酶的存在：致癌RNA病毒、蛙卵、白细胞、滋养层细胞。 逆转录酶作用特点 逆转录酶具有三种酶活性： 以RNA作模板的dNTP 聚合活性 RNase活性:水解杂化分子中的RNA单链， 以DNA为模板的的dNTP聚合活性 合成反应也按照5′→3′延长的规律 逆转录酶的作用 逆转录酶 逆转录酶（RNase H） 逆转录酶 RNA 模板 DNA-RNA 杂化双链 单链DNA 双链DNA 分子生物学研究可应用逆转录酶，作为获取基因工程目的基因的重要方法之一，此法称为cDNA法。 以mRNA为模板，经逆转录合成的与mRNA碱基序列互补的DNA链。 试管内合成cDNA cDNA ?complementary DNA? 逆转录酶 SI核酸酶 DNA聚合酶Ⅰ 碱水解 三、滚环复制和D环复制 滚环复制(rolling circle replication) 是某些低等生物的复制形式，如?X174和M13噬菌体等。不需要引物。 D环复制(D-loop replication) 是线粒体DNA (mitochondrial DNA，mtDNA)的复制形式。复制时需要合成引物。 DNA损伤（突变）与修复DNA Damage (Mutation) and Repair 遗传物质的结构改变而引起的遗传信息改变，均可称为突变，也称为 DNA损伤(DNA damage)。 一、突变的意义 （一）突变是进化、分化的分子基础 （二）突变导致基因型改变 （三）突变导致死亡 （四）突变是某些疾病的发病基础 突变就其后果而言并非都是危害生命的，也有积极意义，