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PRAS40-读书报告2008.12.3PPT

PRAS40的研究进展报告人：李新导师：陈临溪教授南华大学药物药理研究所 lx820913@ 读书报告 PRAS40的研究进展主要内容 PRAS40的含义 PRAS40的发现 PRAS40的结构特征 PRAS40的细胞生物学功能 2003年斯坦福大学 Kovacina等人发现了一种 Proline-rich-Akt Substate,40kDa.故命名为PRAS40 .该发现也被誉为2004年斯坦福大学学术研究的亮点之一. PRAS40作为Akt的作用底物和14-3-3的结合蛋白，它在细胞生长、凋亡、转化以及肿瘤发生等方面起重要作用。 PRAS40的含义 PRAS40的发现(1) 蛋白质相互作用实验方法免疫共沉淀和亲和层析共分离酵母双杂交系统 FAR WESTERN 表面等离子共振（SPR）法 FAR WESTERN Western blot 是免疫印记，而Far western 是蛋白质铺盖技术，两者其实在本质上是相似的，只是免疫印记是直接用抗体去检测抗原，常用于蛋白质定性；而Far western则是用标记的蛋白（125I或荧光）去probe与之相互作用的蛋白，或再用抗这种蛋白的抗体显示这种蛋白的结合位置，用于研究蛋白质的相互作用。基本步骤： 1.表达和提纯获得蛋白A，并作荧光或放射性标记，或制备抗A抗体 2.细胞总蛋白SDS(一起染色，另一块转膜) 3.电转膜 4.封闭 5.加入蛋白A，如A带标记，洗膜后直接显影；如未标记，可加抗A抗体再加二抗。 PRAS40的发现(2) PRAS40结构特征 PRAS40的细胞生物学功能 PRAS40与信号转导 PRAS40与细胞生长 PRAS40与细胞凋亡 PRAS40与肿瘤 PRAS40与细胞生长 PRAS40与细胞凋亡