专题二 基因工程的应用PPT.ppt

基因工程技术在 生化工程中的应用 ;第一节 概述 第二节 基因工程药物生产过程 常用的工具酶 常用的克隆载体 目的基因的获得 目的基因与克隆载体的体外重组 目的重组克隆的筛选、鉴定与分析 目的基因在宿主细胞中的表达 基因工程菌（细胞）的培养与发酵 第三节 转基因动物制药 第四节 转基因植物制药;第一节 概述;● 基因工程: 是通过对Nucleic acid 分子的Insert, Assemble and Recombinant而实现遗传物质（germ plasm）的重新组合，再借助Virus，Bacterium，Plasmid or other Vectors，将Target gene转移到新的 Host Cell System，并使Target Gene在新的Host cell system 进行Replication and Expression的技术。 ● 基因工程技术最成功的成就: 用于新型生物技术药物的研制; A、材料来源困难或制造技术问题而无法付诸应用； B、从动物脏器中提取出来，也因造价太高，或因来源困难而供不应求； C、由于免疫抗原、病毒感染等缘故，使它们在使用上受到限制。 ;4、内源性生理活性物质在作为药物使用时存在的不足之处，可以通过基因工程和蛋白质工程进行改造；IL-2,125半胱氨酸—丝氨 酸提高活性及稳定性；tPA缩小分子延长半衰期 5、利用基因工程技术可获得新型化合物，扩大药物筛选来源。;6、为新药研发提供了新途径和新技术，极大的提高了药物研发速度，缩短药物研发速度。 7、促进传统制药工业的技术改造，为制药工业提供新技术。;三、基因工程药物发展简史;Genentech 公司;Genentech的骄人业绩;美国已批准上市的基因工程药物（1997.7）;;;“863”高技术计划在生物技术领域研究的三个主题之一是：新型药物、疫苗和基因治疗，重点是利用现代生物技术手段，开发化学合成法难以生产的药品。;基因工程药物的种类：;我国已批准上市的基因工程药物和疫苗;我国已批准上市的基因工程药物和疫苗;基因工程生产药物的优点：; 稀少珍贵的蛋白质药物; 畜牧业中的应用; 种植业中的应用; 种植业中的应用;常用的工具酶 常用的克隆载体 目的基因的获得 目的基因与克隆载体的体外重组 目的重组克隆的筛选、鉴定与分析 目的基因???宿主细胞中的表达 基因工程菌（细胞）的培养与发酵 产物分离纯化、除菌过滤 半成品检定 包装 ;基因工程制药由上游工程和下游工程组成。 上游工程是研究开发必不可少的环节，主要在实验室内完成。包括目的基因的分离、重组质粒的构建、组建基因工程菌 (或细胞) 等程序。 下游工程是把上游工程成果产业化的过程。包括确立工程菌株或细胞株大规模发酵的最佳参数、新型生物反应器的研制、高效分离介质及装置的开发、分离纯化的优化控制、高纯度产品的制备技术、生物传感器等一系列设备的制造、电子计算机的优化控制等。 基因工程药物制造的主要步骤：;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;*;（二）表达载体;1、真核基因导入大肠杆菌所用的载体;pBV220;（1）pBV220;[A] 结构;A1）DNA复制及重组载体的选择系统;A2）外源目的基因的转录系统;A3）蛋白质的翻译系统;[B] 优点;（2）pET;;2、真核基因导入大肠杆菌具体方式;目的基因在原核细胞中的表达形式;（1）融合蛋白;*;[A] 定义;[B] 优缺点;[C] 改进措施;[D] 融合蛋白的具体表达方式;关键： 融合蛋白与外源蛋白的阅读框要对齐 两个蛋白的结合位点的设计很重要，应便于下一步切除融合蛋白的操作。;（D2）常用的融合蛋白（原核细菌表达蛋白质）;（D3）受体蛋白的切除方法;（2）非融合蛋白;[A] 定义;[B] 优缺点;[C] 非融合蛋白的具体表达方式;（C1）非融合基因—非融合蛋白;（C2）融合基因—非融合蛋白;（3）分泌型表达蛋白;[A] 定义;[B] 分泌蛋白表达的原理图示;[C] 常用的大肠杆菌信号肽;[D] 优缺点;3、影响真核基因在大肠杆菌表达的因素;（3）影响翻译水平的因素 ① 核糖体结合位点的有效性直接影响基因产物的表达。 ② SD序列和真核基因起始密码ATG间的间距，会影响基因产物的表达。 ③ mRN