产淀粉酶的芽孢杆菌 筛选-PPT.pptVIP

从土壤中分离产淀粉酶的 芽孢杆菌 摘要 本实验通过对土壤中的细菌杀灭营养体，芽孢萌发，并用由淀粉充当碳源的选择性培养基培养分离，纯培养后通过镜检得到能产胞外淀粉酶的芽孢杆菌。 巩固微生物分离纯化、细菌生理生化鉴定、染色观察等实验技能，对所学习过的微生物学实验方法进行综合技能训练 培养综合利用微生物学、生物化学等相关知识，自行设计、实施并判断实验结果的能力 学习掌握从环境中分离产淀粉酶菌株以及菌株初步鉴定的方法 目的 实验目的 获得产淀粉酶的菌株并对其进行初步的鉴定 实验前2周在距土壤表层5-8厘米左右处填埋适量 馒头屑，实验前一天用塑料袋在预埋处取样 ` 土壤 样品 1、富集培养基： 16g的可溶性淀粉，蛋白胨5g， NaCl 5g 2、选择性培养基：玉米淀粉 16克，蛋白胨5g， NaCl 5g，琼脂20g，葡萄糖6g PS：培养及含量均为每升 ` 培养基 草酸铵结晶紫染液，95%乙醇，75%乙醇，番红水溶液 ` 试剂 实验材料 实验材料 ` 玻璃器皿 烧杯（500ml） 1 锥形瓶（250ml） 2 培养皿 20 涂布棒 1 移液管（1ml） 移液管（10ml） 6 1 盖玻片，载玻片 若干 试管 玻璃漏斗 6 1 棉花，牛皮纸，滤纸，PH计，玻璃珠，超净 工作台、生化培养箱、电热干燥箱、高压蒸 汽灭菌锅、水浴锅、显微镜、培养接种器具， 离心机等 ` 其他设备及仪器 准备工作 1、包平板，移液管等， 2、配生理盐水50ml（盐浓度0.9%），并将其分装 到5个试管中,每只9ml。 3、配置所需培养基 4、将所需器皿放入灭菌锅灭菌。 目的菌株的富集 NO.3 预实验 NO.2 样本采集 NO.1 实验步骤 选择性分离 NO.4 制片检测 NO.5 纯培养 NO.6 保藏菌种 NO.7 在预埋处采取土样用事先准备好的密封塑料袋装好，注意不要损坏土壤的内部结构 采集样品 预实验（选做） 本预实验是为确定土壤是否会在菌种富集时产生较大影响。 防止土壤中有一部分营养物质，致使长过多的杂菌； 但若除去土壤，可能导致细菌都吸附在土壤颗粒上，除去土壤的同时会除去细菌，对实验结果造成影响 取1g土壤加入离心管中，再加入9ml去离子 水制成土壤混悬液，离心3000r/min 10min. 取上清液进入富集培养阶段 取1g土壤加入离心管中，再加入9ml去离子 水制成土壤混悬液，加入一小层玻璃珠。 进入富集培养阶段 目的菌株的富集 1、取12.5g土壤加入250ml烧杯中，再加入112ml去离子水,充分震荡，制成土壤混悬液。 2、过滤，取上清至锥形瓶中。在锥形瓶中加入2g的可溶性淀粉，蛋白胨0.625g， NaCl 0.625g，调节pH值为7.0-7.2。在37摄氏度摇床培养箱中培养一天，使菌体富集且产生大量芽孢。 3、在85℃-90℃水浴锅中加热10分钟，杀灭菌体，使芽孢得到富集. 将富集后的芽孢菌液上清分别稀释 101、102、103、104、105 倍，分别取菌液0.2ml均匀涂布在十个含葡萄糖的玉米淀粉培养基上，在37摄氏度培养箱培养1天，平板培养基表面便形成了若干分散的单菌落。 2 10 - 选择性分离 ①取其中平板培养基表面形成了若干分散的单菌落的平板，根据有无淀粉水解圈来判断其有产淀粉酶能力，观察水解圈大小及菌落特征。 ②挑取有芽孢杆菌菌落特征的菌落点，通过革兰氏染色制片观察，并与对照板中菌落制片进行对比观察，判别所选菌落是否为芽孢杆菌。（菌落特征 菌落圆形较大，扁平，表面较干燥，边缘不规则） 制片检测