分子生物学 第5章 原核生物的转录PPT.ppt

4. 全酶（Holo Enzyme）功能 用于转录的起始和延伸 依靠空间结构与DNA模板结合 (σ与核心酶结合后引起的构象变化) 专一性地与DNA序列(启动子)结合 结合常数：1014／mol 转录效率低，速度缓慢（ σ的结合 ） Bacterial RNA polymerase 5. 核心酶（Core Enzyme）的功能 作用于转录的延伸过程（终止） 依靠静电引力与DNA模板结合（蛋白质中碱性基团与DNA的磷酸根之 间） 非专一性的结合（与DNA的序列无关） 结合常数：1011／mol Bacterial RNA polymerase T3 RNA聚合酶和 T7 RNA聚合酶 小分子 转录速度快 (200 nt/sec) 识别自身启动子 RNA polymerase differs from organism to organism 6. 其他RNA聚合酶 第三节 大肠杆菌s70启动子 一、 Promoter 启动子 二、promoter efficiency 启动子的效率 一、 Promoter启动子 特异的短的保守序列 位于转录起始位点的上游，用负数表示。 是RNA聚合酶特异性结合和转录起始所必须的。 是指DNA分子上被RNA聚合酶识别并结合形成起始转录复合物的区域 ，它还包括一些调节蛋白因子的结合位点。 Different promoters result in differing efficiencies of transcription initiation, which in turn regulate transcription. Promoter Terminator Transcribed region Sense strand Antisense strand DNA RNA Transcription +1 -55 to +20: 全酶的结合 -20 to +20: 聚合酶紧密结合 ，防止 DNaseΙ的降解 Up to position –40: 最重要 (mutagenesis analysis) -10 and –35 sequence: 6 bp, 对大肠杆菌基因的起始转录最关键 s70 promoter 开始转录 T T G A C A A A C T G T -35 区 (Pribnow box) T A T A A T Pu A T A T T A Py -10 区 1 -30 -50 10 -10 -40 -20 5 ? 3 ? 3 ? 5 ? 原核生物启动子保守序列 RNA-pol辨认位点 (recognition site) 5? 5? RNA聚合酶保护区 结构基因 3? 3? -10 sequence (Pribonow box， Pribonow框) 高度保守序列，位于 DNA解旋开始的部位。 由6个碱基组成，其中心位于-10位置处，在许多不同的大肠杆菌基因启动子中都存在。 保守序列为 TATAAT. 头两个碱基 (TA) 和最后的碱基 T 高度保守。 与转录起始位点(+1)之间的距离为 5 -8 bp。 其功能是: (1) RNA pol紧密结合; (2) 形成开放启动复合体；酶在此处与DNA结合成稳定的复合物，在转录方向上解开双链形成开放型起始结构。 (3) 使RNA pol定向转录。 -35 sequence(Sextama盒, Sextama box): RNA聚合酶的起始识别区；σ亚基识别-35序列，为转录选择模板 位于-35位置处的一个保守的六聚体序列 TTGACA 头三个碱基 (TTG) 是高度保守的 与 –10 box 之间的距离为16-19 bp RNA聚合酶的松弛（初始）结合位点 RNA聚合酶依靠其σ亚基识别该位点， 为转录选择模板——识别位点 重要性:很大程度上决定了启动子的强度 Transcription start site 转录起始位点 转录开始时模板上的第一个碱基，90％基因的起始位点是嘌呤 G比A普遍 (i.e. CGT or CAT) 在起始核苷酸的两侧是C和T 大肠杆菌RNA聚合酶全酶所识别的启动子区 T85T83G81A61C69A52 T89A89T50A65A100 二、 promoter efficiency 启动子的效率 There is considerable variation in sequence between different promoters, and the transcription efficiency can vary by up to 1000-fold . The –35 sequence :s因子识别的