动植物细胞培养技术PPT.ppt

2.3 动物细胞培养技术;1962年，实现了仓鼠肾细胞（BHK）的大规模培养，这一成果标志着动物细胞大规模培养技术的成熟与商业应用时代的开始。 1975年，成功融合了小鼠B淋巴细胞和骨髓瘤细胞，构建了能生产特定单克隆抗体的杂交瘤细胞系。 1986年，首次成功地用微囊化技术大规模培养杂交瘤细胞来生产单克隆抗体。 ;动物细胞的形态 A、贴壁依赖型 依赖型细胞的生长繁殖需要一个固体支撑物。体外培养时，依赖型细胞通过改变表面形态形成称为“假足”的突出物，借以吸附在培养器皿内壁或其他固体支撑物上。大多数动物细胞，包括非淋巴组织细胞和许多异倍体细胞和原核细胞均属此类型。 1、成纤维细胞（fibroblast 或mechanocyte type) 2、上皮细胞（epithilium cell) 3、游走细胞（wondering cell） 4、多形性细胞（polymorphic cell) ;;B、悬浮型或非贴壁依赖型 非依赖型细胞能以悬浮的、游离的形态进行深层培养。来源于血液、淋巴组织的细胞和其他转化细胞均属于这一类型细胞，可采用类似于微生物培养的方式进行悬浮培养。悬浮培养时细胞呈圆形。;生产用动物细胞的要求 原代细胞 二倍体细胞系 转化细胞系;1、原代细胞 是直接取自动物组织器官经过粉碎消化而获得的细胞悬液（109/g）。 需要大量动物，费钱费劳力。 鸡胚细胞、原代兔肾细胞、鼠肾细胞、 淋巴细胞。;2、二倍体细胞系;二倍体细胞有正常细胞的特点;3、转化细胞系;4、融合细胞系;三、动物细胞培养特性;动植物细胞培养和微生物培养的比较（续）;四、动物细胞的大规模培养及过程控制;2、温度 不同来源的动物细胞，其最适生长温度不同。人和哺乳动物的最适生长温度是37 ℃，而昆虫细胞的最适生长温度为25～28 ℃。动物细胞的培养温度必须严格控制，允许波动范围在±0.25 ℃之内。 3、通气与搅拌 溶解氧是细胞代谢所必需的。动物细胞培养过程中溶氧浓度必须适中，溶氧浓度过高可能对细胞产生毒害作用，但当溶氧浓度过低时，又成为细胞生长的限制因素。;培养基 B、血清 1、常用血清： 小牛血清、胎牛血清、马血清、人血清 添加血清有助于细胞贴壁和生长。 2、血清提供的主要成分： 蛋白质、多肽、激素、代谢物和营养物、无机物 天然培养基的优点：营养成分丰富，培养效果好； 缺点：来源有限，成分复杂，个体差异大。;培养基 C、合成培养基 1、氨基酸 2、维生素 3、盐 4、葡萄糖 5、有机添加剂 6、激素和生长因素 合成培养基的优点：来源方便，标准化产品； 缺点：不能完全满足细胞的生长需求，通常还需要加入一定量的天然培养基予以补充。;;动物细胞的培养方式;1、悬浮培养 适合非贴壁依赖细胞、兼性贴壁细胞 操作简便、培养条件均一、传质和传氧较好、易扩大培养规模 细胞体积小、难采用灌流培养、细胞密度低 通气搅拌罐式与气升式生物反应器;2、贴壁培养 适合贴壁细胞、兼性贴壁细胞 优/缺点与悬浮培养相反 在传代或扩大培养时需要酶将细胞从基质上消化下来（胰酶、二乙烯四乙酸钠/EDTA、胰酶-柠檬酸盐、胰酶-EDTA、胶原酶、链霉蛋白酶、木瓜酶等）;3、贴壁-悬浮培养 （1）微载体培养 扩大贴附面积、保持悬浮状态 葡聚糖类、聚苯乙烯类、胶原类;动物细胞微载体培养技术;理想微载体：;植物细胞培养技术;概述;一、植物细胞的获取;愈伤组织;二、植物培养过程特性; （3）植物细胞在培养中后期（对数生长期的中后期）易凝集成为较大尺寸（300～400 μm）的团块。细胞表面高分子粘性物质的存在是形成细胞团的原因。细胞团的产生和生长使培养液的流变学特性发生改变，培养液表观粘度增大。 （4）植物细胞的培养过程通常为好氧过程。植物细胞代谢所需的氧量低于微生物，适当地控制供氧速度是保证植物细胞生长和产物代谢的重要条件。 ;三、植物细胞培养方式;四、影响植物细胞培养的因素及优化策略;;影响植物细胞培养的因素 （1）细胞的遗传特性 （2）温度 （3）pH值 （4）营养成分 （5）光 （6）搅拌和通气 （7）前体 （8）生长调节剂