原生质体培养实验PPT.pptVIP

实验五 原生质体培养 一、实验目的与意义 学习原生质体制备和培养的方法。 原生质体分离纯化后，在适当的培养基上应用合适的培养方法，能够再生细胞壁，并启动细胞持续分裂，直至形成细胞团、长成愈伤组织或胚状体、分化和发育成苗，最终再生成完整植株。 二、实验器材 超净工作台、震荡摇床、各种接种工具、微孔滤膜过滤器 三、实验药品 MS培养基各种母液、NAA、6-BA、2，4-D、2-N-吗啉乙磺酸（MES）、纤维素酶（Onozuka R-10，Japan）、崩溃酶（Driselase）、果胶酶（Pectinase、Serva）、半纤维素酶（Hemicellulase，Sigma）、离析酶（MacerozymeR-10）、CaCl2.2H2O、KH2PO4.H2O、KN03 、MgS04.7H20 KI 、CUS04.5H2O、甘露醇、葡萄糖、蔗糖、琼脂。 四、实验步骤 1、培养基及试剂的配制 原生质体培养基：MS+2，4-D 0.5+NAA1+BA0.5+蔗糖250mg/L+葡萄糖10000mg/L+（琼脂1.2%） CPW溶液：KH2P04 27.2 mg/L，KN03 101 mg/L，CaCl2.2H20 1480 mg/L