噬菌体展示及酵母展示PPT.ppt

2 是利用FIolP的絮凝结构域的黏附能力创建一个表面展示系统。它包括FIolP的絮凝结构域FS和FL蛋白，分别由1099和1447个氨基酸组成，含有一个分泌信号区和目的蛋白插入位点。目的蛋白的N端与FIolP的絮凝功能域融合，融合蛋白通过它的絮凝功能结构域与细胞壁的甘露聚糖链的非共价相互作用而诱导细胞粘着。 噬菌体展示技术 它将外源基因插入丝状噬菌体基因组中，从而使表达的外源肽或蛋白与噬菌体衣壳蛋白融合而展示在噬菌体表面，被展示的蛋白或肽可以维持相对稳定的空间结构和生物学活性. 肽库的构建 噬菌体随机肽库是由上亿种与噬菌体外壳蛋白以融合的形式呈现在噬菌体表面的多肽所组成，库中上亿种多肽分别呈现在上亿个噬菌体表面，众多重组型噬菌体便组成了噬菌体随机肽库。 构建肽库的关键是获得足够的独立噬菌体克隆。以6肽为例，至少应获得lo 7～109以上的独立克隆。 根据噬菌体载体的不同，噬菌体展示系统主要分为：丝状噬菌体系统、入噬菌体系统、T4噬菌体系统以及．T7噬菌体系统。 丝状噬菌体 常以一组随机多肽编码序列或基因群插入噬菌体展示载体，形成噬菌体展示文库。在噬菌体展示文库的每个噬菌体粒子只展示一种序列的外源肽链，不同的噬菌体粒子展示不同序列的外源肽链。 主要外壳蛋白PVIII和4种次要外壳蛋白PIII、PVI、PIX、PⅦ。PIII与PVIII蛋白一般主要用作展示外源蛋白的锚定蛋白。