第四章 中药制剂含量分析.pptVIP

第四章 中药制剂的含量分析 第四节 高效液相色谱法 （High Performance Liquid Chromatograph HPLC） 一、定 以高压液体为流动相的液相色谱分析法称为高效液相色谱法。 二、特点 高分辨，高灵敏，快速，适用范围宽，自动化程度高。 特别适合中药的定性定量分析，《中国药典》中大多数中成药的含量测定采用此法。 HPLC 与普通色谱法相比，具有分离效能高、分析速度快、检测灵敏度高等特点； 与气相色谱法相比，有适用范围广、流动相选择性大、色谱柱可反复应用以及流出组分容易收集等优点。 因流动相为液体，固体样品只要求制成溶液而不需要气化，因而不受样品挥发性的限制，对于挥发性低，热稳定性差，分子量大的高分子化合物以及离子型化合物尤为适宜，如氨基酸、蛋白质、生物碱、核酸、甾体、类脂、维生素以及无机盐类等。 HPLC与经典液相色谱法(LC)及气相色谱法(GC)的比较 近年来，高效液相色谱仪器进一步得到普及，样品纯化处理方法进一步自动化、多样化，为HPLC法用于中药及其制剂的质量控制提供了应用基础和广阔的前景。 现已广泛应用于中药及其制剂中的有效成分及指标成分的检测、杂质或有关物质检查、有害物质或添加物的检测及中药指纹图谱的分析。 《中国药典》收载的564个成方及单味制剂品种中，有438个建立了含量测定，采用HPLC法分析的为412个，占94%。如牛黄解毒丸、双黄连口服液等制剂中黄芩的含量测定；牛黄降压丸、猴头健胃胶囊等制剂中白芍、赤芍的含量测定；三黄片、烧伤灵酊等制剂中大黄、虎杖的测定；香砂养胃丸、藿香正气水中厚朴的含量测定等。 主要分离类型与原理 一、液-固吸附色谱 （liquid-solid adsorption chromatography） 固 定 相：固体吸附剂为，如硅胶、氧化铝等，较常使用的 是5～10μm的硅胶吸附剂。 流 动 相：各种不同极性的一元或多元溶剂。 基本原理：组分在固定相吸附剂上的吸附与解吸； 适用于分离相对分子质量中等的油溶性试样，对 具有官能团的化合物和异构体有较高选择性。 缺 点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾。 二、液-液分配色谱 （liquid- liquid partition chromatography） 固定相与流动相均为液体（互不相溶）； 基本原理：组分在固定相和流动相上的分配； 流 动 相：对于亲水性固定液，采用疏水性流动相，即流动相的极 性小于固定液的极性（正相 normal phase），反之，流 动相的极性大于固定液的极性（反相 reverse phase）。 正相与反相的出峰顺序相反； 固 定 相：早期涂渍固定液，固定液流失，较少采用； 化学键合固定相：将各种不同基团通过化学反应键合到硅胶 （担体）表面的游离羟基上。C-18柱（反相柱）。 三、离子交换色谱 （ion-exchange chromatography） 固 定 相：阴离子离子交换树脂或阳离子离子交换树脂； 流 动 相：阴离子离子交换树脂作固定相，采用酸性水溶液；阳 离子离子交换树脂作固定相，采用碱性水溶液； 基本原理：组分在固定相上发生的反复离子交换反应；组分与离 子交换剂之间亲和力的大小与离子半径、电荷、存在 形式等有关。亲和力大，保留时间长； 阳离子交换：R—SO3H+M+=R—SO3M+H+ 阴离子交换：R—NR4OH+X-=R—NR4X+OH- 应 用：离子及可离解的化合物，氨基酸、核酸等。 四、离子色谱（ion chromatography） 离子色谱是在20世纪70年代中期发展起来的一中技术，其与离子交换色谱的区别是其采用了特制的、具有极低交换容量的离子交换树脂作为柱填料，并采用淋洗液抑制技术和电导检测器，是测定混合阴离子的有效方法。 五、离子对色谱 （ion pair chromatography） 原理：将一种（或多种）与溶质离子电荷相反的离子（对离子或反离子）加到流动相中使其与溶质离子结合形成疏水性离子对化合物，使其能够在两相之间进行分配； 阴离子分离：常采用烷基铵类，如氢氧化四丁基铵或氢氧化十六烷基三甲铵作为对离子； 阳离子分离：常采用烷基磺酸类，如己烷磺酸钠作为对离子； 反相离子对色谱：非极性的疏