低温脂肪酶的研究____实验室酵条件优化及酶学特性的研究毕业论文.docVIP

目录 摘要 3 前言 5 1 材料和方法 6 1.1 菌种 6 1.2 仪器 6 1.3 试剂 6 1.3.1甘氨液体发酵基本培养基 6 1.3.2 反应底物乳化液 6 1.3.3 甘氨酸- 氢氧化钠缓冲溶液 7 1.3.4 0.05 mol/L 氢氧化钠溶液 7 1.3.5测定酶液的制备 7 1.4 试验方法 7 2 主要实验操作流程及具体步骤 7 2.1 实验造作流程 7 2.2原始培养基酶活的测定 7 2.2.1 原始培养基 7 2.2.2 酶活的测定 8 2.2.3酶活的计算 8 2.3正交实验 8 2.3筛选最优培养基下微生物产低温脂肪酶的最适温度 9 2.4 不同体积装量的培养基的酶活比较 9 2.5不同接种量培养基酶活的比较 9 2.6 不同碳氮源对酶活的影响 9 2.7不同金属对酶活的影响 9 2.8酶学特性的的研究 9 2.8.1 pH的稳定性与最适的pH 9 2.8.2反应温度的稳定性及最适反应温度和时间 9 3 结果与讨论 9 3.1 原始酶活的测定 9 3.2 正交实验 10 3.3 筛选最优培养基下产低温脂肪酶的最适温度及培养时间 15 3.4 不同体积装量的培养基的酶活比较 16 3.5 不同接种量培养基酶活的比较 17 3．6 不同碳氮源对酶活的影响 18 3.7 不同重金属对酶活的影响 18 3.8 酶学特性的的研究 19 3.8.1 pH的稳定性与最适的pH 19 3.8.2 反应温度的稳定性及最适反应温度和时间 19 4 结论 20 参考文献： 20 谢 辞 21 低温脂肪酶的研究____实验室发酵条件优化及酶学特性的研究 摘要：本研究以羊粪中筛选出的产低温脂肪酶的菌作为研究对象，研究其产生的低温脂肪酶的实验室发酵条件的优化及酶学特性的研究，其中实验室的发酵条件的优化包括：试剂的优化即采用缓冲液与乳化液混合后再吸取，同时对乳化液进行快速搅拌,有利于乳化液均匀分散, 提高了酶的反应速度和活力；发酵培养液的优化即以原始培养基为基础做正交试验筛选出最适的培养基，并与原培养基的酶活比较；培养环境的优化即筛选最适的温度、最适装量、最适接种量、最适的碳氮源、及一些常见金属离子对产酶的影响；酶学特征的的研究即pH的稳定性与最适的pH以及反应温度的稳定性及最适反应温度和时间。结果表明最是培养基为蛋白胨2%，氯化钠0.005%，氯化钙0.005%，吐温80 0.1%。最适培养温度为30℃、最适装量40 mL、最适接种量为10%、最适碳源山梨醇、最适氮源硫酸铵、金属离子Ba2+、 Mg2+、 AL3+ 、Fe2+ 、Mn2+、 Ca2+等会提高酶的活性， Zn2+、 Ni2+、Cu2+、 Co2+对脂肪酶的活性有抑制作用。最适pH为8.0，在30℃时，30min水浴中此酶的酶活最高 关键字：低温脂肪酶；发酵条件优化；酶学特征；优化 The research of low-temperature lipase ——laboratory fermentation conditions optimization and enzymology characteristics Zhujing Summary: The study of producing lipase by sheep were screened for the bacteria as the research object, study on the optimization of fermentation conditions and enzyme properties of laboratory research on low-temperature lipase produced by the optimization of fermentation conditions, which include: laboratory reagent optimization using buffer solution and emulsion mixed after the draw, while the emulsion rapid mixing, is conducive to the emulsion dispersed, increased the enzyme reaction speed and vigor; liquid fermentation optimization to the original medium based orthogonal tests showed that the optimum medium, and medium and Yuan Pei activity comparison; culture