抗体工程研究及进展PPT.ppt

抗 体 人 源 化 一、嵌合抗体：鼠可变区+人恒定区 二、鼠CDRs+人框架区 三、鼠CDRs+人框架区（保留关键鼠残基） 人源化原则 1、CDR残基保持不变。 2、文献报道的重要残基保持不变，包括高风 险残基和维持LOOP结构的关键残基。 3、三维结构模建中重要残基不变，包括模建之中 的包埋残基和模建中影响CDR构型的残基。 改型抗体 （一）人抗体的选择 1、轻、重链来自同一人抗体 2、“best fit” method ,轻、重链来自不同人抗体， 甚至抗体轻、重链各部分可来自于不同的人抗体 选择依据：序列同源性，尤其是框架区序列；考 虑与某一canonical结构结构相关的包 埋残基；isotype 的类型及CDR构型 （二）、关键鼠残基的保留 1、重要鼠残基确定依据 — 比较canonical结构，保留与canonical结构有关的关 键残基 — 保留包埋残基（paking residues） —可变区亚组（sungroup）的保守氨基酸残基 —比较已知结构的抗体，确定FR中影响抗原结合的残基 —框架区残基的突变实验 —抗原结合位点三维结构的模建 —根据晶体结构 2.重要鼠残基的确定方法 (1)只根据可变区的一级序列,不需同源模建 理由:抗体具有高度同源性，结构相当类似 a.只保留与canonical结构有关的残基 b.保留框架区起调节CDRs结构的残基 （2）序列比较和同源模建相结合 a.典型方法 b.可变区‘resurfasing’法 人源化效果 人源化抗体引起免疫反应的 频率降低到12％以下 半衰期延长至几天，有时接近21天（人IgG在体内的半衰期） 9个FDA批准抗体，56个正在进行临床试验的抗体 嵌合抗体: 5 2 (3.5%) 人源化抗体 3 35 (62.5%) 鼠抗体: 1 7 (12.5%) 人抗体: 0 6 其它（兔，弥猴等）: 0 6 人源性抗体的制备 制备人单克隆抗体的难点 受伦理道德的限制不能免疫人。 人外周血淋巴细胞中10%为未刺激的B淋巴细胞， 含有大量的记忆细胞，难以和骨髓瘤细胞融合。 人、鼠杂交瘤不稳定，有易失去人染色体的影响 难以找到合适的骨髓瘤细胞。 制备的人单抗亲和力往往较低。 对于人自身抗原和免疫原性较低的抗原，制备人 单抗相当困难。 一、 链置换法 鼠重链 人 轻链 repertoire 转化 筛选 阳性鼠人杂合抗体 阳性人抗体 分离人轻链 人重链repertoire库 转化 筛选 二,人源性抗体库法 天然抗体库 免疫抗体库 半合成抗体库 全合成抗体库 背景材料 V CDR3 V V CDR3 构建大的未经免疫的抗体repertoire噬菌体 显示库 43位未经免疫的人 （BRL15人， tonsil B细胞4人， bone marrow 24人） PCR 构建抗体repertoire库 筛选 高亲和性 人抗体 1.4 ?1010 特点：1、所需时间少（二周） 2、获得对自身抗原具有高亲和力的人源性抗体 全套抗体repertoire库的应用 1. 提高抗体的亲和性和特异性 2.