改组织学绪论(7版)PPT.ppt

扫描电镜 （Scanning electron microscope, SEM） 观察细胞或组织的表面结构 组织块经取材固定后, 干燥 ,在标本表面先后喷一层碳膜和合金膜,镜下扫描成像 透射电镜 电子密度高: 当电子束投射到密 度大吸附重金属多的结构时, 电 子被散射的多, 因此, 射落到荧 光屏上的电子少而呈暗像, 电镜 照片呈黑或深灰色, 称为电子密 度高。反之称为电子密度低。 影像较黑称电子密度高 反之称电子密度低 (三)组织化学术 组织化学术: 为应用化学、物理、生物化学、免疫学或分子生物学原理和技术, 与组织学技术相结合而产生的技术, 能在组织切片定性、定位、定量地显示某种物质的存在与否以及分布状态。 细胞化学术:前述技术用于游离细胞样品则称为～(cytochemistry)。 1. 一般组织化学术 基本原理是在切片上添加某种试剂, 和组织中待测反应物发生反应, 其终产物或为有色沉淀, 以用光镜观察, 或为重金属沉淀以用电镜观察。 (1) 糖类:PAS反应, pariodic acid Schiff reaction (2) 脂类: 油红、尼罗蓝及苏丹类染料 (3) 核酸: 福而根反应→DNA; 甲基绿- 派若宁反应→DNA绿色,RNA红色。 (4) 酶类: 酶组织化学术。通过显示酶的 催化活性以表示酶的存在。 PAS反应 过碘酸 ---- Schiff反应(periodic acid Schiff reaction)： 简称PAS反应，是确定组织或细胞中有无多糖或糖蛋白存在的一种方法。 原理： 多糖 PA 氧化 多醛 Schiff 试剂 紫红色沉淀 2、免疫细胞（组织）化学 利用抗原（antigen, Ag），抗体（antibody,Ab）特异结合的原理，用已知抗体检测未知抗原的一种方法 原理： 肽和蛋白质均具有抗原性, 当把人或动物的某种蛋白质作为抗原注入另一种动物, 其体内则会产生针对该抗原的特异性抗体。将抗体从动物血清中提出后, 与标记物相结合, 即成为标记抗体。 用标记抗体与组织切片孵育, 抗体则与组织中相应抗原特异性结合在显微镜下通过观察标记物而获知肽或蛋白质的分布部位。常用的标记物有荧光素, 辣根过氧化物酶、胶体金。 * 组织学与胚胎学第一章 组织学绪论 目的要求 1．掌握组织的基本概念和类型，细胞、组织、器官、系统的关系。 2．熟悉组织学常用研究技术的基本原理及其应用。 3．了解组织学研究内容和学习这门课程的目的。 一、组织学的研究内容 组织学（histology）：研究机体微细结构 及其相关功能的科 学 组织学常用量度单位 微米(1μm =0.001mm) 纳米 (1nm=0.001μm) 消化系统 复层扁平上皮 涂　片 组织学研究内容 　细胞 细胞外基质 组织 上皮组织 结缔组织 肌肉组织 神经组织 器官和系统 人体 意义： 只有深入了解机体的结构才可能透彻阐明其功能。掌握组织学的基本知识和技能,是将来学好生理学和病理学的前提。 二、组织胚胎学研究技术 问题 解决方法 观察对象太小 放大 显微镜 观察对象无色，无反差 染色（HE染色） 观察对象生化成分不同 细胞化学、免疫组织化学 观察对象是活体 培养 (一) 光镜技术 分辨率(Resolution)是指能够分辨相邻两点之间的最小距离。LM的分辨率约为0.2μm。 1. 切片(Section): 将组织切薄使光线可以透过。 a. 固定(Fixation): 为保存新鲜组织的微观结构，尽快将组织浸入到酒精，甲醛等固定剂中。 b. 石蜡包埋(Paraffin embedding): * 脱水(Dehydration): 用浓度逐渐升高的酒精 (70~100%)将组织中的水完全置换出来。 * 透明(Clearing): 用二甲苯完全置换出酒精。 * 浸蜡(Infiltration): 在60~62?C时，用液态石蜡完全置换出二甲苯。室温时石蜡凝固成固态，内含待切组织。 c. 切片: 用切片机将组织切成1~20μm厚的蜡片，然后将其放到温水上，待其完全