本科生设计性实验(生化——蚕豆病)PPT.ppt

2012年设计性实验;案例;;理论依据;初步判断是何种病？;6-磷酸葡萄糖脱氢酶缺乏使磷酸戊糖途径受阻。NADPH+H+缺乏致血还原型谷胱甘肽生成不足。 红细胞被破坏，则可被肝等单核吞噬细胞识别并吞噬，释放血红蛋白，进一步分解为珠蛋白和血红素，而血红素被吞噬细胞降解为胆红素。 胆红素是人体内原型抗氧化剂，能够清楚超氧化剂和过氧化物自由基，因患儿体内有大量过氧化氢，氧化应激可诱导HO-1的表达，从而增加胆红素的量升高来抵御氧化应激状态。;;从生化代谢解释患儿的临床表现和实验室检查结果 ;1. 血尿、排酱油色尿、面色苍白;2. 皮肤及巩膜黄染;3. 体温升高;;实验设计;实验思路;一、实验目的 1、检测患者体内6-磷酸葡萄糖脱氢酶活性以及发病原因 2、掌握高铁血红蛋白还原法测6-磷酸葡萄糖脱氢酶的实验原理及方法 3、了解蚕豆病的发病机制及原因;二、实验原理 在全血中加入亚硝酸钠，使红细胞中的亚铁血红蛋白氧化为高铁血红蛋白（MHb）,高铁血红蛋白在高铁血红蛋白还原酶的作用下又被还原为亚铁血红蛋白。在这过程中，高铁血红蛋白还原酶不仅需要亚甲蓝作为递氢体，还需要由G6PD参与磷酸戊糖途径形成NADPH作为辅酶才完成上述反应。所以，G6PD缺陷症的患者其MHb还原率下降（分光光度技术）。 ;三、实验器材及试剂 器材：离心机、分光光度计、微量移液器 水浴箱、1.5mlEP管、抗凝管，试管 试剂： ① 0.18mol/L亚硝酸钠-葡萄糖溶液； ② 0.4mmol/L亚甲蓝溶液 ； ③ 0. 28 mol/L 葡萄糖溶液、混合液 （等量①+②+③）生理盐水、抗凝剂、 患者静脉血、蒸馏水 ;四、实验步骤 1、取静脉血1.8mL于抗凝管(含0.2mL109mmol/L抗凝剂+葡萄糖20mg），混匀 2、离心沉淀1000r/min15min 3、调整血细胞∶血浆=1∶1，混匀，（调整后全血） 4.1ml0.18 mol/L亚硝酸钠、1ml0.28mol/L葡萄糖溶液、0.14 mmol/L亚甲基蓝液，混匀，得到混合试剂1ml ;5、取试管3 支,标上A、B、S ,按下表加入试剂;五、实验结果 实验结果计算：;六、实验分析 该患者可能患有先天性镰刀贫血症或蚕 豆病。 正常的高铁血红蛋白还原率75%，若计算所得还原率低于75%，且患者姐姐也有类似症状，患者吃过蚕豆后发病，故可推断患者患有蚕豆病;七、注意事项 ;要想探讨该病发生的分子基础，可以用哪些技术检测什么目的基因？我组讨论认为：要想探讨该病发生的分子基础 ，需要对目的基因进行基因结构分析，即DNA序列检测;患者体型瘦小与该病症是否有关，为什么？ ;我们认为体型瘦小与该病有关，原因分析如下： 溶血性贫血 红细胞比容下降 营养物质运输不足（糖、蛋白质、脂类物质代谢障碍） 缺乏营养 体型瘦小;谢谢