益骨胶囊含药血清的对共育体系中igfi水平及tgfβmrna表达的影响.doc

益骨胶囊含药血清对共育体系中IGF-I水平及TGF-β1mRNA表达的影响 ABSTRACT.4 前 言..6 1. 现代医学对骨质疏松症的研究6 1.1 OP 的流行病学及危害 性6 1.2 OP 的分类与诊断..7 1.3 病因及发病机制.8 1.4 OP 的防治现状.10 1.5 现代医学对骨质疏松症的研究进展12 2. 中医学对 OP 的认识及研究进展18 2.1 中 医 学关于 OP 的早期记载及命名.18 2.2 中医学的 “ 肾主骨 ” 学说 的 形 成和内 容..19 2.3 病因病机..20 2.4 辨证论治..22 2.5 中药防治骨质疏松作用机理研究.23 3. 中药血清药理学研究方 法25 3.1 中药血清药理学对多系统的实验研 究..26 3.2 中药血清药理学对病原体的实验的研究.27 3.3 对中药血清体外药理实验意义的论 证..28 3.4 对中药血清药理的药动学及药物化学研究29 4. 益骨胶囊防治骨质疏松的研究概述..29 4.1 益 骨 胶囊方 解30 4.2 益 骨 胶囊既 往 的 临床研 究.30 4.3 益 骨 胶囊既 往 的 实验研 究.30 5. 本研究的思路和目的..31 实验一 益骨胶囊含药血清对共育体系中 IGF-I 水平的影响..33 1. 实验材料.33 1.1 主要试剂..33 1.2 主要设备和器材..33 1.3 实验动物..34 2. 实验方法.34 2.1 主要试剂配置方法.34 2.2 成骨细胞的分离与鉴定..36 2.3 破骨细胞的分离与鉴定..37 2.4 成骨细胞 -破骨细胞平面式共育体系的建立..38 2.5 含药血清的制备..39 2.6 ELISA 法检 测 IGF-I 的含量40 2.7 统 计 学处理.40 3. 实验结果..40 3.1 成 骨 细胞鉴 定40 3.2 破 骨 细胞鉴 定41 3.3 成骨细胞 -破骨细胞共育体系的建立..41 3.4 各剂量组含药血清不同添加浓度对 OB 增殖的量效曲线421暨南大学硕士研究生学位论文 3.5 益骨胶囊对共育体系中成骨细胞 IGF-I 的表达.43 4. 讨论43 4.1 平 面 式成骨 -破骨细胞共育体系建立的意义43 4.2 中药血清药理学方法应用意义..44 4.3 IGF-I 与骨质疏松的关 系45 5. 实验小结.46 实验二 益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞表达 TGF- β mRNA 影响..47 1 1. 实验材料.47 1.1 主要试剂..47 1.2 主要实验仪器及设备47 1.3 实验动物..47 1.4 实验药物..47 2. 实验方法.48 2.1 主要试剂配置方法..48 2.2 成骨细胞的分离与鉴定..48 2.3 破骨细胞的分离与鉴定..48 2.4 成骨细胞 -破骨细胞共育体系的建立..48 2.5 含药血清的制备..48 2.6 FQ-PCR 法检测益骨胶囊对共育体系中成骨细胞分泌 TGF- β 的影响48 1 3. 实验结果.50 3.1 解 链 曲线结 果50 3.2 测定的荧光定量阳性标准品梯度扩增曲线51 3.3 测定的荧光定量阳性标准曲线分析52 3.4 益骨胶囊含药血清对共育体系中成骨细胞分泌 TGF- β mRNA 的影响.53 1 4. 讨论53 5. 实验小结.54 结 语55 参 考 文 献56 附 图64 附 录65 致 谢662暨南大学硕士研究生学位论文 主要简略语中英文对照表 英文缩写 英文全称 中文全称 BBC Benefiting-bone capsule 益骨胶囊 OP Osteoporosis 骨质疏松症 PMO Postmenopausal osteoporosis 绝经后骨质疏松症 POP Primary osteoporosis 原发性骨质疏松症 OB Osteoblast 成骨细胞 OC Osteoclast 破骨细胞 BMD Bone mineral density 骨密度 HRT Hormone replacement therapy 激素替代疗法 E2 17Beta-estradiol 雌二醇 TNF-a Tumor necrosis factor-a 肿瘤坏死因子 -a BMP-2 Bone morphogenetic protein-2 骨形成蛋白 -2 IGF-1 Insulin- like growth factor 胰岛素样生长因子 -I TGF- β Transforming growth factor-beta1 转化