生化 本科—翻译PPT.ppt

一、多肽链折叠为天然构象的蛋白质 新生肽链的折叠在肽链合成中、后完成，新生肽链N-端在核糖体上一出现，肽链的折叠即开始。可能随着序列的不断延伸肽链逐步折叠，产生正确的二级结构、模体、结构域到形成完整空间构象。 多肽链自身氨基酸顺序储存着蛋白质折叠的信息，即一级结构是空间构象的基础。 细胞中大多数天然蛋白质折叠都不是自动完成的，需要其他酶和蛋白质辅助。 几种有促进蛋白质折叠功能的大分子： 分子伴侣 (molecular chaperon) 蛋白质二硫键异构酶 (protein disulfide isomerase, PDI) 3. 肽-脯氨酰顺反异构酶 (peptide prolyl-cis-trans isomerase, PPI) 1. 分子伴侣: 分子伴侣是细胞内一类可识别肽链的非天然构象、促进各功能域和整体蛋白质正确折叠的保守蛋白质。 分子伴侣有以下功能： ① 封闭待折叠蛋白质暴露的疏水区段 ② 创建一个隔离的环境，可以使蛋白质的折叠互不干扰 ③ 促进蛋白质折叠和去聚集 ④ 遇到应激刺激，使已折叠的蛋白质去折叠 （1）热休克蛋白(heat shock protein, Hsp) 属于应激反应性蛋白质，高温应激可诱导该蛋白质合成。热休克蛋白可促进需要折叠的多肽链折叠为有天然空间构象的蛋白质。 E.coli热休克蛋白包括Hsp70 (Dna K)、Hsp40 (Dna J)和Grp E三族。 IF-3 IF-1 A U G 5 3 IF-2 GTP IF-2 -GTP GDP Pi 翻译起始复合物形成过程： 指在mRNA模板的指导下，氨基酸依次进入核糖体并聚合成多肽链的过程 1. 进位 (positioning)/注册 (registration) 2. 成肽 (peptide bond formation) 3. 转位 (translocation) （二）延长 肽链延长在核糖体上连续循环进行，又称为核糖体循环(ribosomal cycle)，包括以下三步： 每轮循环使多肽链增加一个氨基酸残基 1. 进位 又称注册(registration)， 是指一个氨基酰-tRNA按照mRNA模板的指令进入并结合到核糖体A位的过程 延长因子EF-Tu催化进位 EF-Ts协助重新生成EF-Tu-GTP复合物 Tu Ts GTP GDP A U G 5 3 Tu Ts E 进位的反应过程： 2. 成肽 在转肽酶(peptidase)的催化下，核糖体P位上起始氨基酰-tRNA的N-甲酰甲硫氨酰基或肽酰-tRNA的肽酰基转移到A位并与A位上氨基酰-tRNA的?-氨基结合形成肽键 成肽的反应过程 3. 转位 在转位酶的催化下，核糖体向mRNA的3?端移动一个密码子的距离，使mRNA序列上的下一个密码子进入核糖体的A位，而占据A位的肽酰-tRNA移入P位。 需要延长因子EF-G参与。 EF-G有转位酶(translocase)活性，可结合并水解1分子GTP，释放的能量促进核糖体向mRNA的3?端移动，使起始二肽酰-tRNA-mRNA相对位移进入核糖体P位，而卸载的tRNA则移入E位。 E fMet A U G 5 3 fMet Tu GTP 成肽→转位→下一轮进位 进位 转位 成肽 肽链合成延长（核糖体循环）过程 （三）终止 核糖体A位出现mRNA的终止密码子后，多肽链合成停止，肽链从肽酰-tRNA中释出，mRNA、核糖体大、小亚基等分离。 终止阶段需要释放因子RF-1、 RF-2和 RF-3参与。 RF-3可结合核糖体其他部位，有GTP酶活性，能介导RF-1、RF-2与核糖体的相互作用 释放因子的功能： 识别终止密码子 RF-1特异识别UAA、UAG RF-2特异识别UAA、UGA 诱导转肽酶转变为酯酶活性 催化新生肽链与结合在P位的tRNA之间的酯键水解，使肽链从核糖体上释放 原核生物肽链合成终止 二、真核生物的肽链合成过程 （一）起始 1. 核糖体大小亚基分离 2. 起始氨基酰-tRNA同40S小亚基结合 3. mRNA在小亚基定位结合 4. 核糖体大亚基结合 参与真核生物翻译的蛋白质因子 种类 生物学功能 起始因子 eIF-1 多功能因子，参与翻译的多个步骤 eIF-2 促进Met-tRNAiMet与小亚基结合 eIF-2B 结合小亚基，促进大、小亚基分离 eIF-3 结合小亚基，促进大、小亚基分离；介导eIF-4F复合物-mRNA与核糖体小亚基结合 eIF-4A eIF-4F复合物成分，有RNA解螺旋酶活性，解除mRNA 5?-端的发夹结构，使其与小亚基结合 eIF-4B 结合mRNA，促进mRN