蓝细菌中RNaseE的C蛋白与其他蛋白互作的研究毕业论文.docVIP

蓝细菌中RNaseE的C端蛋白与其他蛋白互作的研究 目录 摘要 错误！未定义书签。 Abstract 2 缩略语表 2 1．前言 错误！未定义书签。 1.1 蓝细菌 2 1.2 鱼腥蓝细菌PCC7120 错误！未定义书签。 1.3 核糖核酸酶 1 1.3.1多聚核苷酸磷酸化酶PNPase 2 1.3.2核酸核糖酶E 3 1.4 研究目的与意义 4 2.实验试剂，材料，仪器和软件 5 2.1实验中所用到的主要试剂 2 2.2实验所用到的菌株 2 2.3实验所用到的主要仪器 2 3.实验方法 6 3.1 IPTG诱导目标蛋白的表达 6 3.1.1IPTG诱导蛋白质表达的原理 7 3.1.2IPTG诱导蛋白质表达的实验步骤 错误！未定义书签。 3.2 压力破碎法从PCC7120中提取蛋白 错误！未定义书签。 3.3 镍柱亲和层析法分离纯化目标蛋白 错误！未定义书签。 3.3.1镍柱亲和层析法分离纯化蛋白的原理 错误！未定义书签。 3.3.2镍柱的处理 错误！未定义书签。 3.3.3镍柱结合蛋白 错误！未定义书签。 3.3.4蛋白的洗脱 错误！未定义书签。 3.4 SDS检测目标蛋白的纯度和含量 错误！未定义书签。 3.4.1安装电泳槽 错误！未定义书签。 3.4.2分离胶和浓缩胶的制备 错误！未定义书签。 3.4.3蛋白质样品的预处理 错误！未定义书签。 3.4.4蛋白质样品上样及电泳 错误！未定义书签。 3.5 dot-blot验证蛋白质的相互作用 错误！未定义书签。 3.5.1dot blot检测蛋白互作的原理 错误！未定义书签。 3.5.2dot blot检测蛋白互作的实验步骤 错误！未定义书签。 3.5.3预实验 错误！未定义书签。 4.结果与分析 2 4.1蛋白质的纯化结果与分析 错误！未定义书签。 4.1.1蛋白A4396的纯化结果与分析 错误！未定义书签。 4.1.2蛋白4331C1-H的纯化结果与分析 错误！未定义书签。 4.1.3蛋白4332C2-H的纯化结果与分析 错误！未定义书签。 4.2dot-blot验证蛋白质相互作用的结果与分析 错误！未定义书签。 5.讨论 错误！未定义书签。 参考文献 2 致 谢 错误！未定义书签。 摘要 在大肠杆菌中已被证实，mRNA降解体是以RNase E为组装支架，PNPase(核苷酸磷酸化酶)三聚体、RhlB(RNA酶解螺旋酶B)单体以及enolase(烯醇化酶)二聚体的相互作用结合共同组成的功能复合物，共同协调完成对mRNA等RNA底物的加工剪切及降解过程。降解体复合物其它几种组分PNPase、RhlB和enolase在RNase E的C端非催化区域结合位点与RNaseE结合。但是在蓝细菌中RNaseE 在mRNA降解体中发挥什么作用及其生理特性并未被证实。 鱼腥蓝细菌PPC7120研究蓝细菌的模式菌株，我们以PPC7120为研究对象，分别诱导提纯了PPC7120菌株异形胞中的RNaseE的两个蛋白——居于C端的A4331和A4332以及PNPase的A4396蛋白，用dot blot 的方法证明A4331是否与A4332、A4396有相互作用，为研究蓝细菌中RNaseE 在mRNA降解体中发挥的作用及其生理特性提供基础。 关键词：鱼腥蓝细菌 RNaseE PNPase 蛋白诱导纯化 dot-blot  Abstract It has been formulated that the RNA degradosome of Escbericbia coli is a multiprotein complex involved in the degradation and processing of most messenger RNAs. the principal components are RNase E acting as a scaffold for the assembly of a multiprotein complex, the monosome of RNA helicaseB(RhlB) , the tripolymer of polynucleotide phosp -horylase (PNPase) and the dimer of enolase. RNaseE is a multidomain protein with an N-terminal catalytic region and a C-terminal noncatalytic region which contains sites for binding RNA and for protein-protein interactions with other compo