第七章核酸及核酸代谢07-wfPPT.ppt

复制和转录的区别 5.1 RNA转录合成的特点 5.1 Characters of RNA Biosynthesis 转录（transcription）的不对称性就是指以双链DNA中的一条链作为模板进行转录，从而将遗传信息由DNA传递给RNA。 对于不同的基因来说，其转录信息可以存在于两条不同的DNA链上。 一、转录的不对称性 能够转录RNA的那条DNA链称为模板链(template strand) ，也称作有意义链或Watson链。 与模板链互补的另一条DNA链称为编码链(coding strand)，也称为反义链或Crick链。 模板链 编码链 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 5’ 5? 3? 3? 5? 模板链 编码链 编码链 模板链 转录方向 转录方向 模板链和编码链的相对性 5′···GCAGTACATGTC ···3′ 3′··· c g t g a t g t a c a g ···5′ 编码链 模板链 mRNA 5′···GCAGUACAUGUC ···3′ 转录 N······Ala · Val · His · Val ······C 蛋白质 翻译 模板链、编码链与转录及翻译的关系 RNA转录合成时，以DNA作为模板，在RNA聚合酶的催化下，连续合成一段RNA链，各条RNA链之间无需再进行连接。 二、转录的连续性 RNA转录合成时，只能向一个方向进行聚合，所依赖的模板DNA链的方向为3→5，而RNA链的合成方向为5→3。 三、转录的单向性 RNA转录合成时，只能以DNA分子中的某一段作为模板，故存在特定的起始位点和特定的终止位点。 特定起始点和特定终止点之间的DNA链构成一个转录单位，通常由转录区和有关的调节顺序构成。 四、有特定的起始和终止位点 5.2 参与转录合成的酶和蛋白因子 5.2 Enzymes and Protein Factors for RNA Biosynthesis 原料：NTP （ATP, UTP, GTP, CTP）。 模板：双链DNA中的单链DNA。 酶：RNA聚合酶（DDRP，RNA-pol）。 其他蛋白质因子：如转录因子、终止因子等。 参与RNA转录合成的物质 这是一种不同于引物酶的依赖DNA的RNA聚合酶（DDRP）。 该酶在单链DNA模板以及四种核糖核苷三磷酸存在的条件下，不需要引物，即可从5→3聚合RNA。 一、RNA聚合酶（DDRP） 原核生物中的RNA聚合酶全酶由五个亚基构成，即?2???。 ?亚基与转录起始点的识别有关，在转录合成开始后被释放；余下的部分（?2??）被称为核心酶，与RNA链的聚合有关。 （一）原核生物的RNA聚合酶 核心酶 (core enzyme) 全酶 (holoenzyme) ?? ? ? ? ? ?? ? ? ? 原核生物RNA聚合酶的核心酶和全酶 原核生物RNA聚合酶亚基的功能 真核生物中的RNA聚合酶可按其对?-鹅膏蕈碱的敏感性而分为三种，它们均由10~12个大小不同的亚基所组成，结构非常复杂，其功能也不同。 （二）真核生物的RNA聚合酶 RNA聚合酶Ⅱ的分子结构 酵母RNA聚合酶Ⅰ和Ⅱ的电子晶体图 在真核生物中，转录的起始过程较为复杂，现已发现数百种蛋白因子与RNA转录合成有关。 直接或间接参与转录起始复合体的形成的蛋白因子被称为转录因子（transcriptional factor, TF）。 二、转录因子 原核生物中的终止因子?蛋白是一种六聚体的蛋白质，亚基的分子量为50kd。 ?蛋白能识别转录终止信号，并与RNA紧密结合，导致RNA的释放。 三、终止因子 DNA复制的过程 五、PCR技术与DNA扩增 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction,PCR）又称为无细胞分子克隆法； 原料： DNA模板，耐热的DNA多聚酶，四种dNTP和引物； 过程：以待扩增的两条 DNA链为模板，由一对人工合成的寡聚核苷酸引物介导，通过DNA聚合酶酶促反应，体外快速扩增特异的DNA序列。 实质是通过引物延伸核酸（DNA）的某个区域而进行的DNA复制合成； 每轮循环包括变性、复性和延伸三个阶段，经30轮循环可扩增百万倍； 在PCR循环中主要有三步反应： 1、模板DNA在高温（95℃）下变性； 2、引物与模板单链复性退火； 3、复制延伸，一般在72℃进行； 五、PCR技术与DNA扩增 PCR 4.4 DNA的损伤（突变）与修复 4.4 DNA Damage （Mutation）and Repair 由自发的或环境的因素引起DNA一级结构的任何异常的改变称为DNA的损伤，也称为突变（mutation）。 常见的DNA的损伤包括碱基脱落、碱基修饰、交联，链的断裂，