第三章食品微生物检验的试剂及配制PPT.ppt

1. 溶血试验 1）原理： 某些细菌在代谢过程中能产生溶血素，可使人或动物的红细胞发生溶解，不同的细菌有不同的溶血反应，借此可鉴别细菌。 2）试验方法 平板法 试管法 平板法 将培养物接种于血平板培养基上，36±1 ℃培养24～ 48h，观察结果。 溶血试验的溶血类型及现象 （1） α（甲型）溶血: 菌落周围出现较窄的半透明的草绿色溶血环。 （2） β （乙型）溶血: 菌落周围出现较宽的透明溶血环。 （3）γ（丙型）溶血: 菌落周围无溶血环。 甲型（α-）溶血 乙型（β-）溶血 丙型（γ-）溶血 β （乙型）溶血 试管法 将待检菌培养液与等量的2%羊血球混合，在36±1 ℃培养16～ 18h，观察结果。如溶血，培养液可出现透明状。 3）结果观察与记录 有溶血现象，为阳性，记+； 无溶血现象，为阴性，记 - 2. 血浆凝固酶试验 1）原理：致病性葡萄球菌能产生血浆凝固酶，可使血浆中的纤维蛋白原转变成纤维蛋白，附着在细菌的表面，形成凝块；或作用于血浆凝固酶原，使它成为血浆凝固酶，从而使抗凝的血浆发生凝固现象,为阳性。 2）试验方法 （1）玻片法： 取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴生理盐水，另一端滴加一滴兔（人）血浆，挑取菌落分别与生理盐水和血浆混合，5 min内,如血浆内出现团块或颗粒状凝块，而盐水滴仍呈均匀混浊，则为阳性;如两者呈均匀混浊，无凝固则为阴性。 有凝块 均匀混浊 血浆 生理盐水 血浆凝固酶试验 （2）试管法 取灭菌小试管3支，各加入血浆－无菌水(1:1) 0.5ml，1支加入被检菌株的营养肉汤培养液（或浓菌悬液）0.5ml；其余2支作对照管，1支加入金黄色葡萄球菌的营养肉汤培养液或菌悬液0.5ml作阳性对照;另1支加入营养肉汤或0.9％氯化钠溶0.5ml作空白对照。将3管同时放37℃温箱或水浴中培养，每0.5 h观察一次， 4 h 内无凝固现象者，观察直至24小时。 阳性反应 阴性反应 不凝固 少量、零散凝固 明显的块状凝固 巨大块凝固 完全凝固，倒置不流动 金黄色葡萄球菌血浆凝固酶实验 3）试管法的结果观察与记录 空白对照管的血浆流动自如，阳性对照管血浆凝固。 试验管血浆凝固者为阳性； 均无凝固则为阴性。 其他  柠檬酸盐利用试验 1.有机酸盐的利用试验 枸橼酸盐利用试验 1）原理： 某些细菌能利用柠檬酸盐作为唯一碳源，分解枸橼(柠檬)酸盐生成碳酸盐；同时分解培养基的铵盐生成氨，使培养基变为碱性，使指示剂溴麝香草酚蓝由淡绿转为深蓝色，为阳性。 肠杆菌科各种细菌利用柠檬酸盐的能力不同，有的菌可利用柠檬酸钠作为碳源，有的则不能。 大肠埃希菌 产气肠杆菌 大肠埃希菌不能利用柠檬酸盐，故不能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长。柠檬酸盐利用试验阴性。 产气肠杆菌能在以柠檬酸盐为唯一碳源的培养基上生长，并分解柠檬酸盐产生CO2，再生成碳酸盐，使培养基由中性变为碱性，培养基中的指示剂BTB由绿色变为蓝色。 枸橼酸盐利用试验（C）实验原理 举例 2）试验方法 挑取待检菌，在西蒙柠檬酸盐培养基斜面上密集划线接种，在36±1 ℃培养1~4天，每天观察结果。 3）结果观察与记录 斜面有菌苔生长，培养基斜面变为蓝色或深蓝色，为阳性，记+； 无菌苔生长，培养基斜面仍为绿色者，为阴性，记- 柠檬酸盐试验原理及斜面照片 阳性+ 2.三糖铁（TSI）试验 1）三糖铁试验的原理 如果细菌可利用乳糖和蔗糖发酵产酸或产酸产气，培养基全部变黄；如果只可以利用葡萄糖，葡萄糖被分解产酸可使斜面先变黄，但因量少，生成的少量酸，因接触空气而氧化，加之细菌利用培养基中含氮物质，生成碱性产物，故使斜面最后为红色，底部由于是在厌氧状态下，酸类不被氧化，仍保持黄色。 如果细菌又能分解含硫化合物，产生硫化氢，培养基底部变黑。 制好的培养基 对照管 斜面红色，底面黄色 培养基全黄色 斜面、底部黄色，并产生H2S 斜面红色，底部黄色，产生H2S 底面黄色，并产生CO2 2）试验方法 以接种针挑取待试菌可疑菌落或纯培养物，穿刺接种并涂布于斜面，置36±1℃培养18~24h，观察结果。 MR-VP试验原理及照片 V-P 1.靛基质（吲哚）试验 2.H2S试验 3.尿素酶试验 （二）氨基酸和蛋白质代谢试验 1.吲哚试验 （靛基质试验） 1）原理：某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合物。 史上最快最全的网络文档批