第六章 核酸化学PPT.ppt

酶 底物 作用部位 作用产物 外切酶 磷酸二酯酶 DNA， RNA 5’端，5’连接处 3’核苷酸 3’端，3’连接处 5’核苷酸 内切酶 脱氧核糖 核酸酶 I DNA 3’连接处 3’-羟核苷酸为3’末端寡核苷酸及剩余部分 脱氧核糖 核酸酶II 5’连接处 3’-核苷酸为3’末端寡核苷酸及剩余部分 核糖核酸 酶T1 RNA 5’连接处碱基是G 3’-鸟苷酸为3’末端寡核苷酸及剩余部分 核糖核酸 酶 I 5’连接处碱基是 Pyr 3’-嘧啶类核苷酸为3’末端寡核苷酸及剩余部分 返回 DNA酶法测序 1977年sanger发明末端终止法测定DNA序列 根据sanger测序法，现在已经有各种DNA自动测序仪，DNA测序速度大大加快HGP得以提前完成 上页 下页 章首 节首 DNA酶法测序 上页 下页 章首 节首 DNA酶法测序 上页 下页 章首 节首 平行进行四组反应，每组反应均使用相同的模板，相同的引物以及四种脱氧核苷酸；并在四组反应中各加入适量的四种之一的双脱氧核苷酸，使其随机地接入DNA链中，使链合成终止，产生相应的四组具有特定长度的、不同长短的DNA链。这四组DNA链再经过聚丙烯酸胺凝胶电泳按链的长短分离开，经过放射自显影显示区带，就可以直接读出被测DNA的核苷酸序列,如下图所示： DNA酶法测序 上页 下页 章首 节首 DNA酶法测序 上页 下页 章首 节首 四. DNA的高级结构 DNA的二级结构 DNA的三级结构 上页 下页 章首 DNA的二级结构 DNA的二级结构是双螺旋结构，即两条多聚核苷酸链围绕一个共同轴，相互盘绕在一起构成直径 2nm的双螺旋，互补的碱基(A和T互补 ，G和C互补)通过氢键连接在螺旋内部，碱基平面垂直于右旋的螺旋轴。螺旋结构中两条链走向相反 上页 下页 章首 节首 2.0 nm 小沟 大沟 DNA的二级结构类型 上页 下页 章首 节首 B型结构 两条链反向平行，右手螺旋 碱基在内（A＝T，G≡C）碱基平面垂直于螺旋轴 戊糖在外，双螺旋每转一周为10碱基对（bp） A型结构 碱基平面倾斜20o，螺旋变粗变短，螺距2～3nm。 Z型结构 左手螺旋，只有小沟 返回 返回 稳定DNA双螺旋结构的三种力量 氢键：使四种碱基形成特异配对关系，G-C间可形成3对氢键，A-T之间有两对氢键 。 疏水相互作用：轴向平行相邻的碱基平面自发地相互靠近，从而使碱基缔合、层层堆积，形成了碱基堆积力 ，它是使DNA结构稳定的主要力量。 离子键：磷酸残基上的负电荷与介质中的正离子，如Na+，K+，Ｍg＋等之间形成的离子键。 上页 下页 章首 节首 核酸的三级结构指链状核酸分子的空间构型，即其三维空间排列或组合方式。 DNA的三级结构 上页 下页 章首 节首 DNA的三级结构主要有以下三种： DNA的三级结构 上页 下页 章首 节首 回文结构与镜像结构 特殊DNA的结构 上页 下页 章首 节首 回文结构中的单链可形成发夹结构 特殊DNA的结构 上页 下页 章首 节首 双链回文结构可形成十字架结构 特殊DNA的结构 上页 下页 章首 节首 五. RNA的高级结构 RNA的二级结构 RNA的三级结构 上页 下页 章首 RNA的二级结构 RNA的二级结构基本上是单股分子，其二级结构比DNA简单的多，但也存在少数碱基配对区域即双螺环结构。 上页 下页 章首 节首 （1）占总RNA的15％ （2）一种氨基酸对应最少一种RNA （3）分子中含有较多修饰成分 （4） 3‘-末端都具有CCAOH结构 （5）半数碱基可经过自身回折，形成局部双螺旋“茎” 结构，其间是单链形成的“环”。绝大多数tRNA经过这样的折叠形成4个茎和4个环组成的特征性三叶草形二级结构 。 上页 下页 章首 节首 1、tRNA 占总RNA的80％ 上页 下页 章首 节首 2、rRNA 原核生物 真核生物 核糖体 rRNA 核糖体 rRNA 30s 70s 50s 16s 5s 、23s 40s 80s 50s 18s 5s、5.8s、28s 5sRNA的二级结构 占总RNA的3％～5％ 上页 下页 章首 节首 3、mRNA和hnRNA 真核细胞mRNA的3‘-末端有一段长达200个核苷酸左右的聚腺苷酸(polyA)，称为 “尾结构” ，5’ -末端有一个甲基化的鸟苷酸，称为” 帽结构“ 。 占总RNA的3％～5％ 上页 下页 章首 节首 3、mRNA和hnRNA 原核