第十三章 生化药物与基因工程药物分析PPT.ppt

第十三章 生化药物和基因工程药物 分析概念 ;基本要求; 一、防病、治病的三大药源; 1．生化药物：;2.生物合成药物;DNA重组技术（基因工程）：生产过程为;二、生物制品的种类和特点;分类;;;;2.抗毒素及抗血清的药物;3.血液制品;4.重组DNA制品;细胞因子类：重组人干扰素等 生长因子类：重组人表皮生长因子 激素类：重组人生长激素，重组人胰岛素 酶类：重组链激酶 疫苗：重组乙型肝炎疫苗 单克隆抗体：注射用人T细胞CD3鼠单抗;5. 诊断制品;;6.其他制品; 三、特点 1. 生物体的基本生化成分  2. 分子量大: 分子量测定  3. 结构难确证  4. 全过程的质量控制：原料、生产过程、 最终产品 5. 生物活性检查; 6. 安全性检查 7. 效价（含量）测定： 理化法：有效成分的含量 效价测定和酶活力测定：有效成分 的生物活性;四、生物制品的全程质量控制; 生化药物和基因药物质量控制的项目：  来源与种类 纯度 性状 干燥失重或水分 鉴别 炽灼残渣 氨酸组分分析 生物活性 肽图 热源试验 糖含量 含量分析 ; ;一、理化鉴别法 1.化学鉴别法： 例：溶菌酶 - COiNH- +Cu2+ 络合显色; 2.紫外分光光度法 溶剂：0.01mol/L盐酸 例：三磷酸腺苷二钠 浓度：20μg/ml 判断： λmax：257±1nm A250/A260：0.17～0.27。 3. HPLC法： 利用对照品溶液和供试品溶液色谱图的保留 时间和肽图谱的一致性进行鉴别。 ; 二、生化鉴别法 1.酶法： 例：尿激酶的鉴别---气泡上升法 原理：; 方法： 取小试管，加入尿激酶巴比妥溶液、牛纤维蛋白原溶液，再依次加入牛纤维蛋白溶酶原溶液、牛凝血酶溶液，迅速摇匀，立即置37℃±0.5℃恒温水浴保温，记时。反应系统在30～40秒内凝结，凝结块内有气泡生成，15分钟内凝结块溶解，当凝结块溶解时，气泡逐渐上升。以0.9%氯化钠作空白，同法 操作，凝结块在2小时内不溶。 ;2. 电泳法：以肝素鉴别为例。;;例如:; 2. 生物法： 利用生物体进行试验来鉴别药物。 例：家兔惊厥试验鉴别胰岛素。 利用胰岛素的降糖作用。给家兔大剂量注射胰岛素，家兔惊厥，迅速静注50%GS，惊厥停止。; 一般杂质检查 特殊杂质检查：原料药纯度分析 生产和贮存过程中杂质的检查 安全性检查; ;㈠宿主细胞（菌）蛋白残留量的检查;酶联免疫吸附法（ELISA）;㈡外源性DNA残留量的检查;;;过程 生物素-DNA单链结合蛋白和尿素酶-抗ssDNA的单抗与变性的宿主细胞DNA结合，形成复合物； 通过亲和素将这种复合物连接到生物素-硝酸纤维素膜； 通过洗涤去除未结合的非特异性蛋白； 最后将生物素-醋酸纤维素膜置于有尿素溶液的读数仪，尿素酶催化尿素为NH3和CO2导致溶液的PH 的变化，读数仪根据此变化推算出外源性DNA的浓度 ;;㈢产品相关杂质的检查;㈣残余抗生素的检查;;二、安全性检查;;;;;;生化药物和基因药物的含量表示方法：百分含量：适用于结构明确的小分子药 物或经水解后变成小分子的 药物。生物效价或酶活力单位：适用于酶类、 蛋白质类药物。;含量测定方法： 理化分析法： 化学分析法：重量测定法、滴定分析法  电化学分析法 光谱分析法：比色法、紫外分光、荧光分光光法 色谱分析法：HPLC法：RP-HPLC、 HPIEC 、HPGFC、 灌注色谱法、HPCE法 酶法：酶活