第十五章 骨髓细胞检验PPT.ppt

（一）特异性酯酶染色 特异性酯酶又称氯乙酸萘酯酶或粒细胞酯酶，主要分布在骨髓粒细胞系统中。特异性酯酶染色通常采用氯乙酸萘酯AS-D作底物，但染色的方法有多种，现介绍Moloney法。 （一）特异性酯酶染色 原 理 氯乙酸萘酯AS-D被细胞内酯酶水解，产生萘酚AS-D，萘酚AS-D再与稳定的重氮盐偶联，生成不溶性有色沉淀，定位于细胞质中。 （一）特异性酯酶染色 试 剂 1．固定液 400g/L甲醛1份与甲醇9份混合。 2．Veronal乙酸缓冲液 3．基质液 4．苏木素液 （一）特异性酯酶染色 操 作 1．新鲜干燥涂片用甲醛熏蒸5～10min固定，或用甲醛甲醇液固定30s。 2．水洗，晾干。 3．放入37℃基质液中30min。 4．水洗，苏木素液复染2min。 5．水洗，晾干镜检。 （一）特异性酯酶染色 中性粒细胞 结果 阳性反应为出现红宝石样颗粒定位于细胞质中。 （一）特异性酯酶染色 临床应用 氯乙酸萘酯酶阳性主要见于粒细胞系统。早幼粒细胞出现强阳性反应，酶活性不随细胞分化成熟而增强，分化好的原始粒细胞呈弱阳性反应。嗜酸性粒细胞呈阴性反应，嗜碱性粒细胞呈阴性或弱阳性反应。单核细胞呈阴性或弱阳性反应。巨核细胞、血小板、淋巴细胞和红细胞系统均为阴性反应。 （二）非特异性酯酶染色 非特异性酯酶又称单核细胞酯酶。血细胞的非特异性酯酶及其同工酶种类很多，凡作用于短链脂肪酸的酶均称为非特异性酯酶。非特异性酯酶染色法又可分为三类：中性非特异性酯酶、酸性非特异性酯酶及碱性非特异性酯酶染色法。中性非特异性酯酶染色法由于底物不同又可分为α-醋酸萘酯酶染色法、醋酸萘酚AS酯酶染色法及醋酸萘酚AS-D酯酶染色法三种。 （二）非特异性酯酶染色 原理 血细胞中的NSE将基质液中的α-醋酸萘酯水解，产生α-萘酚，α-萘酚再与重氮盐偶联，生成不溶性的有色沉淀定位于胞质中。 （二）非特异性酯酶染色 试 剂 1．0.067 mol/L 磷酸盐缓冲液（pH 7.4） 2．基质液 3．10g/L甲基绿水溶液。 （二）非特异性酯酶染色 操 作 1．新鲜骨髓涂片置40g/L甲醛生理盐水中固定5min。 2．流水冲洗5min。 3．放入37℃基质液中温育lh。 4．水洗。 5．10g/L甲基绿水溶液复染5min。 6．水洗，干后镜检。 （二）非特异性酯酶染色 氟化钠抑制试验 可对阳性结果作进一步的区分。在40ml基质液中加入氟化钠（NaF）60mg（每毫升基质液加 NaF 1.5mg），按上述方法染色，若阳性明显减弱或呈阴性，示被NaF抑制。可以用公式计算NaF抑制率。 凡抑制率＞50％者，提示确受NaF所抑制。 （二）改良Gomori钙-钴法 试剂 1．基质液(临用前配制) 2．20g/L硝酸钴水溶液 3．20g/L硫化铵（或用前以10ml蒸馏水加硫化铵4滴而成） 4．2g/L核固红染色液 （二）改良Gomori钙-钴法 操作 1．取新鲜血片或骨髓片用95％乙醇固定5～10min，待干。 2．置37℃基质液中温育4～6h，防止蒸发。 3．水洗，用20g/L硝酸钴染5min。 4．流水洗净硝酸钴，再以20g/L硫化铵染5min。 5．流水洗净硫化铵，用2g/L核固红染液复染5min。 6．流水冲洗，待干，油镜观察。 （二）改良Gomori钙-钴法 结 果 积分判断（一） 4分（++++） 全细胞充满黑色颗粒，结成团块，甚至覆盖于细胞核上。 3分（+++） 细胞质内充满黑色颗粒，但颗粒之间有空隙；或胞质内有3/4面积充满了致密的黑色颗粒沉淀。 （二）改良Gomori钙-钴法 结果 积分判断（二） 2分（++） 胞质面积的1/2呈黑色或灰黑色颗粒沉淀；或全部胞质染成均匀灰色，无颗粒。 1分（+） 胞质面积的1/4呈黑色或灰黑色颗粒沉淀；或全部胞质染成均匀浅灰色，无颗粒。 0分（－） 胞质内无灰色或黑色沉淀。 三、铁粒染色 人体中的铁以铁蛋白的形式存在。铁蛋白的聚合体称含铁血黄素。用普鲁士蓝反应可显示铁的存在，称为铁粒染色。骨髓中含有一定量的铁粒，称细胞外铁；红细胞胞质中含有铁粒，称为细胞内铁。胞质中含有铁粒的中、晚幼红细胞，称为铁粒幼红细胞；含铁粒的成熟红细胞，称为铁粒红细胞。 三、铁粒染色 原理 含铁血黄素中的铁离子在盐酸环境中与低铁氰化钾作用，成为蓝色的低铁氰化铁沉淀，定位于含铁的部位。 三、铁粒染色