第四讲组合化学与生物合成PPT.ppt

生物合成工程 Biosynthetic engineering is the rational manipulation of the biosynthetic pathway for a microbial metabolite in order to generate novel products 定向生物合成 Directed Fermentation/Mutasynthesis. The changes in structure can be extended still further by feeding to the producing organism synthetic compounds, which are analogues of natural intermediates in the biosynthetic pathway (Directed Biosynthesis). This is particularly efficient if biosynthesis of the natural intermediate can be knocked out allowing all of the biosynthesis to be directed to the modified product (Mutasynthesis). ???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? Feeding C’ D’ E’ J ????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????? 四、抗生素基因工程简介 抗生素药物基因工程实用化平台 从链霉菌中分离出8个聚酮化合物基因簇，其中聚醚类抗生素基因簇为这一类别之世界首例。科研人员发现了聚酮链延伸过程中形成聚醚的多个功能独特的基因，以及一个崭新的聚醚链释放因子。国际上首例聚醚类抗生素—— —南昌霉素生物合成基因簇的结构组成、聚醚链形成和释放的机制以及 整个抗生素生物合成组装的分子模型，是我国迄今在抗生素分子生物学 领域最重要的贡献之一。其基因簇已申请中国专利。这一课题的科研人 员还成功克隆了国际上第一例烯类抗生素生物合成基因簇；同时利用已 经分离的抗生素基因簇进行抗生素生产率提高和品种改造的遗传工程探 索，获得了提高霉素产量并产生了新结构化合物的菌株，为在抗生素产 业上利用基因工程技术实现高产和开发创新药物提供了模型平台。 上海交通大学与国家基因组南方中心、华中农业大学、江西农业大学合作完成 基因工程 限制性内切酶 运载体必须具有三个条件：①在宿主细胞中能保存下来并能大量复制；②有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的DNA插入；③有一定的标记基因，便于进行筛选。如大肠杆菌的pBR322质粒携带氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，就可以作为筛选的标记基因。 载体 质粒载体 目的基因的制备 1 鸟枪法? 类似于鸟枪发射散弹。具体的做法是：用若干个合适的限制酶处理一个DNA分子，将它切成若干个DNA片段。这些片段的长度相当于或略大于一个基因。然后，将这些不同的DNA片段分别与适当的载体结合，形成重组DNA，再将它导入到相应的营养缺陷型细菌中。最后，把这些细菌中的这段DNA分离出来，再进行一系列的操作，就可以获得基因。这种方法的缺点是专一性较差，分离出来的有时并非一个基因，但由于这种方法操作简便，所以现在仍然广泛采用。 2 反转录法? 这种方法是在核糖体合成多肽的旺盛时期，首先把含有目的基因的mRNA的多聚核糖体提取出来，分离出mRNA，然后以mRNA为模板，用反转录酶合成一个互补的DNA，即cDNA单链，再以此单链为模板合成出互补链，就成为双链DNA分子。这种方法专一性强，但是操作过程比较麻烦，特别是mRNA很不稳定、生存时间短，所以要求的技术条件较高。 3 根据已知的氨基酸序列合成DNA? 这种方法是建立在DNA序列分析基础上的。当把一个基因的核苷酸序列搞清楚后，可以按图纸先合成一个个含少量（10～15个）核苷酸的DNA片段，再利用碱基对互补的关系使它们形成双链片段，然后用连接酶把双链片段逐个按顺序连接起来，使双链逐渐加长，最后得到一个完整的基因。 ? 把纯化的DNA导入细菌细胞的过程称为转化。原核细胞的转化过程就是导入外源DNA的过程。对于大肠杆菌来说，人们一般采用先用冰冷的CaCl2处理，然后置于