土壤中分解尿素细菌分离及计数(第二课时).pptVIP

复习：1.如何分离土壤中分解尿素的细菌？ 2.如何对土壤中分解尿素细菌的数目进行计数？ 阅读课本P23-P26，根据导学案的提示，完成以下问题。 1.实验设计包括哪些内容？ 2.实验设计的流程是什么？ 3.每一步是如何操作的？注意事 项是什么？ 4.如何进行结果分析与评价？ 小组互对答案，对有疑问的问题相互讨论，并确定发言人，按导学案上的要求完成本组的问题展示。 实验设计包括对—————、————、———、——和————，——————以及———等的综合考虑和安排。 实验方案 所需仪器 材料 用具 药品 具体的实施步骤 时间安排 一、实验设计流程 土壤取样 制备培养基 样品稀释 取样涂布 微生物的培养与观察 细菌计数 ◆注意事项：取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。 二.实验的具体操作及注意实项 ㈠土壤取样 从肥沃、湿润、酸碱度接近中性的土壤中取样。先铲去表层土3cm左右，再在距离地表3cm-8cm处取样，将样品装入事先准备好的信封中。 ㈡制备培养基 制备以尿素为唯一氮源的选择培养基和牛肉膏蛋白胨培养基。 ◆注意事项：倒平板时要冷却到50 ℃ ，且要在酒精灯火焰旁进行。 ◆注意事项： （三）样品的稀释 ①应在火焰旁称取土壤10g。 ②在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 ③分离不同的微生物采用不同的稀释度 测定土壤中细菌的数量，一般选用104 ，105 ，106 测定放线菌的数量，一般选用103 ，104 ，105 测定真菌的数量，一般选用102 ， 103 ， 104 为什么分离不同的微生物要采用不同的稀释度？ 原因：不同微生物在土壤中含量不同.例如在干旱土壤中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌数约为2185万，放线菌数约为477万，霉菌数约为23.1万。 ㈣取样涂布 ◆注意事项： 实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 ◆注意事项： ①涂布器和移液管要保持无菌。②如果得到了2个或2个以上菌落数目在30——300的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确，需要重新实验。 ㈤微生物的培养与观察 培养：不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 观察：在相同的培养条件下，同种微生物表现出稳定的菌落特征。包括：形状、大小、隆起程度和颜色。 微生物的培养与观察 （六）细菌计数 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 三、操作提示 无菌操作 做好标记 规划时间 四.结果分析与评价 内容 现象 结论 有无杂菌污 染的判断 对照的培养皿中无菌落生长 培养物中菌落数偏高 菌落形态多样，菌落数偏高 选择培养基 的筛选作用 选择培养基具有筛选作用 样品的稀释 操作 操作成功 重复组的结果 若选取同一种土样，统计结果应 培养基未被杂菌污染 被杂菌污染 被杂菌污染或混入其他氮源 牛肉膏培养基上的菌落数目大于选择培养基上的数目 得到三个或三个以上菌落数目在30～300的平板 接近 五.课外延伸 在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养某种细菌后，如果PH升高，指示剂将变红，说明该细菌能够分解尿素。 3.在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂的目的是( ) A.筛选出能分解尿素的细菌B.对分离的菌种作进一步鉴定 C.作细菌的营养成分 D.如指示剂变蓝就能准确地认定该菌能分解尿素 当堂检测 1.能够测定样品活菌数的方法是( ) A.稀释涂布平板法 B.直接计数法 C.重量法 D.比浊法 2.下列操作步骤顺序正确的是( ) ①土壤取样②称取10g土样，加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中③吸取0.1mL土壤溶液进行平板涂布④依次稀释至101、 102 、 103 、104 、105 、106 、107稀释度 A.①→②→③→④ B.①→③→②→④ C.①→②→④→③ D.①→④→②→③ A C B 4.(2016·四川，10)图甲是从土壤中筛选产脲酶细菌的过程,请据图回答下列问题： (1)图中选择培养基应以________为唯一氮源,鉴别培养基还需添加_______作指示剂，产脲酶细菌在该培养基上生长一段时间后，其菌落周围的指示剂将变成______色。 (2)在5个细菌培养基平板上，均接种稀释倍数为105的土壤样品溶液0.1 mL，培养一段时间后，平板上长出的细菌菌落数分别为163、156、262、178和191。该过程采取的接种方法是___