维生素d临床知识与产品培训课件(ppt 117页).ppt

维生素D3检测试验数据案例 浓度=LN(OD值/3.3317)/-0.0165 中控=39.60482 高控=79.63643 （2）实验数据分析 数据记录和计算方法 数据处理软件 人工处理数据 人工数据处理步骤和方法 1、excel抄录酶标仪数据 2、选中全部数据，插入散点图 （2）实验数据分析 鼠标点击曲线—右键-选择添加趋势线 （2）实验数据分析 X=LN(Y/5.4619)/-0.4244 （2）实验数据分析 【参考值（参考范围）】 本公司采用的参考值范围： 19-57.6ug/l（47.5-144nmol/L） 每个实验室应建立自己的参考范围，本试剂盒检测结果仅作为辅助诊断手段之一，供临床医生参考。 （2）实验数据分析 2、维生素D检测方法 （1）体内维D水平含量与意义 （2）检测维生素D的方法 * 体内血中25-羟维生素D水平 含量与意义 缺乏 10ng/ml 1-25nmol/L 不足 10-30ng/ml 25-75nmol/L 充足 30-100ng/ml 75-250nmol/L 中毒 100ng/ml 250nmol/L 据估计，全世界大约10亿人未达到维生素D足量浓度的最低限30ng/ml （1）体内维D水平含量与意义 临床常见方法 几种方法学对比 ELISA的两种产品对比 * 检测维生素D的方法 （2）检测维生素D的方法 （1）酶联免疫法（ELISA）：IDS、BH （2）化学放光免疫法（CLIA）：雅培、索灵、贝克曼等 （3）电化学发光法（ECLI）：罗氏 * 1、临床常见方法 （2）检测维生素D的方法 酶联免疫法 使抗原或抗体结合到某种固相载体表面，并保持其免疫活性。 使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体，这种酶标抗原或抗体既保留其免疫活性，又保留酶的活性。在测定时，把受检标本（测定其中的抗体或抗原）和酶标抗原或抗体按不同的步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应。 用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与其他物质分开，最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。 加入酶反应的底物后，底物被酶催化变为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据颜色反应的深浅刊物定性或定量分析。 由于酶的催化频率很高，故可极大地地放大反应效果，从而使测定方法达到很高的敏感度。 * 2、几种方法学对比 （2）检测维生素D的方法 化学发光标记免疫分析：又称化学发光免疫分析(CLIA ) , 是用化学发光剂直接标记抗原或抗体的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶酯类化合物——acridinium ester (AE) , 其通过起动发光试剂作用而发光, 强烈的直接发光在一秒钟内完成, 为快速的闪烁发光。 灵敏度和精确度比酶免法、荧光法高几个数量级，可以完全替代放射免疫分析、彻底淘汰酶联免疫分析。主要具有灵敏度高、特异性强、试剂价格低廉、试剂稳定且有效期（6-18个月）、方法稳定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高等优点。 * 2、几种方法学对比 （2）检测维生素D的方法 电化学发光技术：在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，用电化学发光剂三联吡啶钌[Ru(bpy)3]2+标记Ab，通过Ag-Ab反应和磁珠分离技术，根据三联吡啶钌在电极上发出的光强度对待测的Ag或Ab进行定量/定性。 高度敏感，可达pg／ml或pmol水平； 特异性强，重复性好，CV＜5％。 测定范围宽，可达7个数量级。 试剂稳定，无毒害，无污染，有效期长，达数月至数年。 操作简单，耗时短，易于自动化。 在对环保很重视的国家，CLIA成了取代RIA的首选方法。 * 2、几种方法学对比 （2）检测维生素D的方法 方法 灵敏度 (检出限) 批内 变异系数 批间 变异系数 线性范围 放免法 0.1ng/ml 3.8~4.1% 6.4~9.5% 5个数量级 酶联免疫法 ng/ml 10-13mol/L 4.5~6.4% 5.64~6.5% 2个数量级 免疫荧光法 10-15mol/L 5% 5% 4个数量级 胶体金层析法 ng/ml 10% 10% 化学发光法 pg/ml 3.1% 3.5~4.6% 3~6个数量级 电化学发光 pg/ml 10-12~10-18mol/ml 5% 5% 7个数量级 时间分辨 荧光免疫法 pg/ml 10-19mol/ml 3.8~4.3% 4.9~5.8% 4~5个数量级 * 免疫标记检测技术对比 （2）检测维生素D的方法 IDSvsBH：.exl 重复性：批内、批间 时间： * 3、ELISA的两种产品对比 对比项目 BH IDS 线性范围 5~100ug/L 9.3～151.2nmol/L 批内CV ≤10% 5.3~6.7% 批间CV ≤15% 4.