分光光度计使用与邻二氮菲分光光度法测定铁实验报告.docVIP

实验八 分光光度计的使用和邻二氮菲分光光度法测定铁 一、实验原理 1、分光光度法基本原理 当光通过溶液后有一部分被物质吸收，如图1所示。如果I0为入射光的强度，It为透过光的强度，则It/I0是透光率T，- lgT定义为吸光度A。实验证明，当一束单色光(一定波长的光)通过一定厚度b的有色溶液时，A=εbc，这种定量关系称为朗伯-比尔定律。其中ε是一个比例系数，它与入射光的波长以及溶液的性质、温度等因素有关，是物质的特征常数。 任何一种物质的溶液对不同波长光的吸收程度是不同的。如果将各种波长的单色光依次通过一定浓度的某一种物质溶液，测量该溶液对各种单色光的吸光度A，以波长λ为横坐标，以吸光度A为纵坐标绘制的曲线称为吸收曲线，如图2所示。最大吸光度所对应的波长称为最大吸收波长，用λmax表示。在λmax处进行测量，光的吸收程度最大，测定的灵敏度和准确度最高。 在一定的条件下，测量一系列已知准确浓度的标准溶液的吸光度A，以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标绘制曲线，即得工作曲线，如图3所示。在分析未知溶液时，根据测量的吸光度A，查工作曲线即可确定出相应的浓度。 图1 溶液对光的吸收 图2 物质吸收曲线 图3 工作曲线 2、邻二氮菲分光光度法测铁原理 邻二氮菲(o-)在pH＝2～9 的溶液中与Fe2+生成稳定的红色络合物，lg K ＝21.3，最大摩尔吸收系数ε =1.1×104，其反应式如下： Fe2+ + 3(o-Phen) = Fe(o-Phen)3 红色络合物的最大吸收峰位于510 nm。对于Fe3+，可用盐酸羟胺事先将其还原至Fe2+。本方法的选择性很高，相当于含铁量40倍的Sn2+、Al3+、Ca2+、Mg2+、Zn2+、SiO32-，20倍Cr3+、Mn2+、V(V)、PO43-，5倍Co2+、Cu2+等均不干扰测定。本实验采用工作曲线法测定铁。 二、基本操作 1、721型分光光度计的结构 721型分光光度计的基本结构：光源、单色器（光栅）、比色槽和比色皿、光电转换器、显示装置（微安表、数码显示屏）。面板结构如图4所示: 图4 721型分光光度计面板结构 2、721型分光光度计使用方法 （1）打开电源开关，指示灯亮，打开比色皿暗箱盖，预热20~30分钟。 （2）调节波长调节旋钮，选择所需的单色光波长，用灵敏度旋钮选择所需的灵敏档。 （3）将装有参比溶液的比色皿放入比色皿架第一格，旋转透光率为0调节旋钮使显示窗口的指针为0 %，盖上比色皿暗箱盖，推进比色皿拉杆使参比溶液位于光路。旋转透光率调节为100旋钮，使显示窗口的指针处于100%。按上述方法连续几次调整0%和100%位即可进行测定工作。 3、721型分光光度计使用注意事项 （1）连续使用仪器的时间不应超过2小时，最好是间歇0.5小时后，再继续使用。 （2）禁止将比色皿放在仪器面板上，应注意保护比色皿的透光面，使其不受损坏或产生划痕，每次使用完毕后，要用蒸馏水洗净并倒置晾干后，存放在比色皿盒内。 （3）仪器不能受潮，应经常注意单色器上的防潮硅胶(在仪器的底部)是否变色。 三、实验步骤 1、铁标准系列溶液的配制 在6个100 mL的容量瓶中，用吸量管分别加入0.0、1.0、2.0、3.0、4.0和5.0 mL 100 μg/mL铁标准溶液，分别加入2 mL10%盐酸羟胺、4 mL0.15% Phen和8 mL10% NaAc溶液，每加一种试剂后摇匀。用水稀释至刻度，摇匀后放置10min。 2、吸收曲线的测定 取铁标准系列溶液3号，用1cm比色皿，以试剂空白（1号）为参比溶液，在440～500nm和520～560nm之间，每隔10nm测一次吸光度；在500～520nm，每隔5nm测定一次吸光度。绘制A-λ吸收曲线。从吸收曲线上找到最大吸收波长λmax。 3、标准曲线的制作 用1cm比色皿、以试剂空白（1号）为参比溶液，在最大吸收波长（510nm）下，测量各溶液的吸光度。以含铁量（μg）为横坐标、吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线。 4、试样中铁的测定 准确移取试液（工业盐酸）2mL于100 mL容量瓶中，按上述步骤显色后在相同条件下测量吸光度，由标准曲线上查出试样中相当于铁的微克数，计算试样中铁的含量(g/l)。 四、数据记录和处理波长 440 450 460 470 480 490 500 520 530 540 550 560 吸光度 0.368 0.389 0.412 0.439 0.468 0.470 0.502 0.515 0.481 0.403 0.268 波长 500 505 510 515 520 吸光度 0.437 0.438 0.430 0.426 2.标准曲线的制作 序