中药显微鉴定上3PPT课件.pptVIP

第二部分 显微描绘与摄影 1、显微测量 在进行显微观察时，有时需测定微细结构的大小，如长度、宽度（直径）等，作为显微鉴定的依据之一。因显微结构一般均很小，通常用微米（µm）作为测量单位，超过1000µm，则可以用毫米为单位。进行显微测量必须用专门的量尺即：目镜量尺(目镜测微尺)和载台量尺(载台测微尺) 。 1.1 目镜量尺与载台量尺 目镜量尺：是放在目镜内的一标尺，为一块圆形的玻璃片直径18～22mm，上面刻有直线，中央亦有精细的刻度，通常长为5mm，精确等分为50或100小格。 载台量尺：是一种特制的玻片中央有一个刻度的标尺，全长为1mm，精确等分为100 小格，每小格长0.01mm ，即10µm。 1.2 目镜量尺的标化 目镜量尺中每一小格的长度，是随显微镜的镜筒长度、目镜与物镜的放大倍数的改变而变化的。因此，必须标化目镜量尺每一小格相当的长度；即一台显微镜在不同目镜与物镜组合下，每一格的长度。 具体方法是：使两种量尺的刻度平行，左边的“0”刻度对齐，再找出第二条重合刻度。如图：在10X物镜下目镜量尺的100小格(0～100)与载台量尺的43小格 (0～43)的长度相等，则目镜量尺的每一小格为：4.3µm 。（10µm×43÷100≈4.3µm） 同样的方法可以标化出各种放大倍数下目镜量尺每小格的长度。 1.3 用显微量尺测量的方法 将欲测定物体的标本片放在载物台上，用目镜量尺测量目的物的小格数，乘以标化出的目镜量尺在该组合下每小格相当的微米数即得。 测量实物时，通常使用高倍物镜。当测量一个物体时，要分别测量其最小值与最大值，得出该物体的长度范围。每个测量值应取15～20个数的平均值。 显微组织简图常用代表符号图 3.1 仪器与设备 显微镜，显微镜摄影仪（照相机、数码摄像头CCD等） 3、显微摄影 要获得好的显微图像，用好显微镜是关键。显微镜分辨能力的高低取决于显微镜光学系统中物镜与聚光镜的性能，而物镜与聚光镜的性能又取决于两者的数值孔径(NA)。 数值孔径与显微镜的各种性能有密切的关系，其与显微镜的分辨力成正比，与焦深成反比；即数值孔径越大，分辨力越大，焦深就越小，则反之。 正确调节使用显微镜视场光阑与孔径光阑（聚光镜的数值孔径是通过孔径光阑调节）的是获得高清晰图像的关键所在。 3.2 正确使用显微镜-获取最佳图像 1.视场光阑的调节 视场光阑位于镜座之中,其作用： (1)控制照明光束的大小，根据物镜的倍率给予不同直径的光束面积,使所观察的视域能受到均匀的照明。 (2)控制杂散光在成像光路系统中的影响，特别是免除杂散光对照相系统的干扰，在显微摄影时起着增减影象反差的作用。 聚光镜的重要参数之一是数值孔径(NA)，控制聚光镜的数值孔径是通过调节聚光镜的孔径光阑（即一个可变光圈）来实现的。 数值孔径的作用：影响显微镜的分辨率，控制显微图像的反差和景深。 通过调整孔径光阑，使聚光镜的数值孔径等于物镜数值孔径的三分之二时，显微镜的分辨率最佳。 2.聚光镜系统(孔径光阑)的调节 聚光镜系统:包括聚光镜主体、前端透镜及孔径光阑。 通常聚光镜的 NA=0.32 前端透镜的 NA=0.63～1.4 显微镜物镜 4X NA=0.10 10X NA=0.25 40X NA=0.65 100X NA=1.25 更不应该用调节聚光镜位置高低的方法来调节视野中的亮度！ 不应该用聚光镜的孔径光阑来调节视野中的亮度！ 显微摄影 传统的显微摄影是指用胶片照相机进行显微摄影的方法。是将显微镜下观察到的图像用显微照相设备摄录下来的一项技术。 显微摄影装置 显微镜、照相（摄影）机系统、曝光控制装置三部分。 3.3 传统的显微摄影技术 显微摄影步骤 1.安装显微摄影装置 将相机，显微镜和照明设备连一起，并能在观察镜中看到所要拍摄的标本。 2.调整好显微镜 聚光器和光源灯的调中，孔径光阑和视场光阑的调节。 3.底片选择 彩色底片、黑白底片，正片或负片，底片感光度的选择 4.曝光的确定 经验法，试摄法，测光表法。 5.取景对焦和拍摄 屈光度的调节，取景，聚焦拍摄 6.冲洗、放大 冲洗底片，洗印放大照片 在此过程中，显微镜的正确使用、取景聚焦、曝光控制及冲洗放大是获得优质图像的关键。 3.3 传统的显微摄影技术 显微镜数码照相技术是与数码相机的工作原理是一致的，只是将CCD（charge couple device 电荷藕合器）直接安装在显微镜上。显微镜上方的CCD将显微镜下看到的图像(光信号)，转变为数字信号输出，通过相关的图像采集软件直接显示在计算机